[發(fā)明專利]一種抗中華鱉免疫球蛋白單克隆抗體及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910100742.0
• 申請日: 2009-07-20
• 公開（公告）號: CN101955534A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈錦玉;徐洋;郝貴杰;潘曉藝;姚嘉赟;尹文林
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N15/06;C12P21/08;G01N33/577
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 梁寅春

1.一種抗中華鱉免疫球蛋白單克隆抗體，其特征是所述單克隆抗體是按以下步驟制備的抗體：

(1)制備中華鱉特異性抗原：中華鱉頸部切斷，采其血置于玻瓶，于室溫下凝固，用無菌棒沿玻瓶內(nèi)壁括撥將血塊與瓶壁的粘連分離后，先于35～38℃放置1.5～3h，再于3～6℃放置8～12h，血清充分析出，離心沉淀，取其上清，制SephadexG-200層析柱，中華鱉血清經(jīng)硫酸銨水溶液粗提并透析濃縮后，用PBS(pH7.4)倍比稀釋，經(jīng)濾膜過濾后上樣，用PBS洗脫，自動采樣器收集洗脫液，并用紫外分光光度計(jì)跟蹤測定洗脫液的蛋白濃度，最先洗脫的蛋白IgM即為中華鱉特異性抗原；該抗原蛋白H鏈分子量為63kD，L鏈分子量均為22kD；

(2)制備多克隆抗體：以所述中華鱉特異性抗原免疫動物，取血，分離出抗血清，純化制得所述多克隆抗體，并以所述中華鱉特異性抗原的包被抗原檢測所述抗血清，證明為含抗所述中華鱉特異性抗原的多克隆抗體；

(3)制備一種雜交瘤細(xì)胞株：以骨髓瘤細(xì)胞與產(chǎn)生抗中華鱉血清蛋白IgM抗體的脾細(xì)胞融合得該雜交瘤細(xì)胞株，所述的脾細(xì)胞取自以所述中華鱉血清蛋白IgM免疫的動物；

(4)制備一種抗中華鱉免疫球蛋白的單克隆抗體：以所述的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生該單克隆抗體，該單克隆抗體對所述的中華鱉免疫球蛋白IgM具有特異性。

2.如權(quán)利要求1所述的一種抗中華鱉免疫球蛋白單克隆抗體，其特征是步驟(1)中，所述血塊與瓶壁的粘連分離后，先于37℃放置2h，再于4℃放置10h，血清充分析出后，2000r/mim離心沉淀；所述層析柱，柱長70cm，直徑1.6cm。

3.如權(quán)利要求1或2所述所述的一種抗中華鱉免疫球蛋白單克隆抗體，其特征是所述硫酸銨水溶液為50％(W/W)水溶液。

4.如權(quán)利要求3所述的一種抗中華鱉免疫球蛋白單克隆抗體，其特征是所述濾膜為厚度0.45μm濾膜。

5.一種檢測中華鱉免疫血清抗體效價(jià)的方法，其特征是用所述抗中華鱉免疫球蛋白的單克隆抗體檢測中華鱉免疫血清抗體效價(jià)。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特是用間接ELISA或間接競爭ELISA檢測。