[發(fā)明專利]矮牽牛體細胞自然突變個體組培擴繁方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910100101.5
• 申請日: 2009-06-22
• 公開（公告）號: CN101578961A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發(fā)明（設計）人: 黃麗春;林新春;方偉;朱圓圓
• 申請（專利權）人: 浙江林學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 周 烽

技術領域

本發(fā)明涉及一種花卉突變個體的組織培養(yǎng)以擴大種群繁殖的方法。

背景技術

矮牽牛(Petunia?hybrida?Vilm)是茄科碧冬茄屬(矮牽牛屬)的一種多年生草本植物，常作一、二年生栽培，株高15-60cm，全株被粘毛，莖基部木質化，嫩莖直立，老莖匍匐狀。單葉互生，卵形，全緣，近無柄，上部葉對生。花單生葉腋或頂生，花較大，花冠漏斗狀，邊緣5淺裂。花期4-10月。蒴果，種子細小。

本申請人在1998年8月對矮牽牛進行葉片組織培養(yǎng)，使其在葉片上直接萌發(fā)出不定芽，然后將其在試管中培養(yǎng)生根再移植盆栽直至開花，發(fā)現了花形特異而美麗的細胞變異個體，其花冠邊緣由淺裂變深裂，呈細皺褶狀，且有白色細條紋鑲邊，花形及花色均與普通矮牽牛有明顯差異。在確定此變異發(fā)生的試管苗標記后，將其再進行試管繼代擴繁并進一步移植盆栽，得到與其相同的花形變異矮牽牛植株，保存擴繁至今已有十一年。因矮牽牛有自花不孕的生物學特性，靠異花授粉種子繁殖的方法不能保持其特異性狀，自然扦插不易生根，只有逐年用組培方法擴繁，保存性狀，維持種苗。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是將這一細胞自然突變形成的矮牽牛珍稀小苗用組織培養(yǎng)育種繁殖的方法，保存性狀擴大種群，更快更廣泛地向社會提供一種更具觀賞價值的矮牽牛新物種，增添矮牽牛家族中的新成員。

解決上述技術問題的方案是：本矮牽牛試管育種繁殖方法經過下列步驟：

(1)矮牽牛突變小苗的繼代擴繁：將新發(fā)現的矮牽牛突變試管小苗作培植體，每4周繼代擴繁，接種于小苗分化培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基由MS鹽類添加磷酸二氫鈉85g/L與White’s維生素，及30g/L蔗糖、100mg/L肌醇、8g/L瓊脂、加入2mg/L?BA即芐氨基腺嘌吟、0.5mg/L?IAA即吲哚乙酸、80mg/L?Adenine?sulfate即硫酸腺嘌吟和50mg/L?L-Tyros?ine即酪氨酸配制而成，溫度25℃，光照強度2500lux，光照時間16h/天，培養(yǎng)30天，得明顯增長且分化新的小芽；

(2)誘導生根與移栽：當小芽長至0.5-1cm高，接種到步驟(1)所述的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天后，便自然發(fā)根，正常情況下生根率達100％。小苗移至馴化室，強光20000lux下馴化兩周移栽，先洗去根部培養(yǎng)基，移至于三者的體積比為蛭石∶珍珠巖∶泥炭＝1∶1∶1的人工混合基質中盆栽，每盆套一透明塑料袋，該袋每2天剪一小口，二周后移入溫室栽種即成。

本發(fā)明的有益效果是將極難發(fā)生又偶然發(fā)現的、由細胞自然突變形成花形特異而美麗的矮牽牛突變個體，避開其自花不孕和扦插難生根的優(yōu)良性狀保存的難題，用組培擴繁方法保存性狀，快速擴大種群，更快、更廣泛地向社會提供一種更具觀賞價值的矮牽牛新物種，增添矮牽牛家族中的新成員。

具體實施方式

本發(fā)明下面結合實施例作進一步詳述：本矮牽牛試管繁育的培養(yǎng)基中，先選用的植物生長激素是0.3-3mg/L的BA加0.5mg/L的IAA加80mg/L?Adenine?sulfate和50mg/L的L-Tyrosine，這是經過BA用0、0.3、1、2、3mg/L加0.5mg/L的IAA五種濃度重復3次，每次每種濃度有20個培植體的對比試驗得出的，2mg/L的BA加0.5mg/L的IAA處理30天后，小芽增長最快分化最多。總之，本發(fā)明所公開的培養(yǎng)基及其配比值，溫度、凝固劑等也可用諸如葡萄糖、瓊脂等替代，培養(yǎng)基各原料的配比值也可分別采用本發(fā)明最佳方案定值的接近值取代，這是顯而易見的。下面給出本發(fā)明的最佳實施例。

本矮牽牛試管育種繁殖方法經過下列步驟：

(1)矮牽牛突變小苗的繼代擴繁：將新發(fā)現的矮牽牛突變試管小苗作培植體，每4周繼代擴繁，接種于小苗分化培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基由MS鹽類添加磷酸二氫鈉85g/L與White’s維生素，及30g/L蔗糖、100mg/L肌醇、8g/L瓊脂、加入2mg/L?BA即芐氨基腺嘌吟、0.5mg/L?IAA即吲哚乙酸、80mg/L?Adenine?sulfate即硫酸腺嘌吟、50mg/L?L-Tyrosine即酪氨酸配制而成，溫度25℃，光照強度2500lux，光照時間16h/天，培養(yǎng)30天，得明顯增長且分化新的小芽；