[發(fā)明專(zhuān)利]蜂王漿中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910099399.2
• 申請(qǐng)日: 2009-06-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101587119A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張曉峰;陳笑梅;施偉良;朱振江
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543;G01N21/31;C07D499/74;C07D499/68;C07D499/76;C07D499/46
• 代理公司: 浙江翔隆專(zhuān)利事務(wù)所
• 代理人: 張建青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蜂王漿中藥物殘留的檢測(cè)方法，特別是一種蜂王漿中萘 夫西林、氨芐西林、阿莫西林、哌拉西林、阿洛西林、氯唑西林、盤(pán)尼 西林G、雙氯青霉素和苯唑西林九種β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留總量的快速提 取和酶聯(lián)免疫測(cè)定方法。

背景技術(shù)

β-內(nèi)酰胺(Beta-Lactams)是指化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有β-內(nèi)酰胺環(huán)的一 大類(lèi)抗生素，包括臨床最常用的青霉素與頭孢菌素，以及新發(fā)展的頭霉 素類(lèi)、硫霉素類(lèi)、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)等其他非典型β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。 β-內(nèi)酰胺類(lèi)的抗菌作用機(jī)理均相似，都能抑制胞壁粘肽合成酶，即青霉 素結(jié)合蛋白從而阻礙細(xì)胞壁粘肽合成，使細(xì)菌胞壁缺損，菌體膨脹裂解， 從而達(dá)到抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。在蜜蜂養(yǎng)殖業(yè)中該類(lèi)藥物被用來(lái)防治歐洲幼 蟲(chóng)腐臭病、中蜂囊狀幼蟲(chóng)病、美洲幼蟲(chóng)病等。食用了含有β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗 生素的食品對(duì)人體會(huì)造成潛在危害：(1)過(guò)敏反應(yīng)；(2)赫氏反應(yīng)；(3) 胃腸反應(yīng)。最重要的是，這類(lèi)藥物很容易造成細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。目前世 界各個(gè)國(guó)家都對(duì)動(dòng)物使用β-內(nèi)酰胺和食品中殘留進(jìn)行了嚴(yán)格的控制。在 我國(guó)，動(dòng)物源性食品中阿莫西林和氨芐西林的MRL為50μg/kg，奶及奶制 品中MRL為10μg/kg；日本規(guī)定在蜂蜜中阿莫西林殘留量不得超過(guò)8μg/kg， 奈夫西林殘留量不得超過(guò)5μg/kg，氨芐青霉素殘留量不得超過(guò)9μg/kg， 芐青霉素殘留量不得超過(guò)4μg/kg，蜂王漿中殘留量則參照一律標(biāo)準(zhǔn) (10μg/kg)。

長(zhǎng)期以來(lái)β-內(nèi)酰胺殘留的檢測(cè)手段主要有大型分析儀器測(cè)試。對(duì)于 肉類(lèi)、水產(chǎn)品中β-內(nèi)酰胺的檢測(cè)主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相 色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)等。另外，微生物法 也是該類(lèi)藥物殘留主要測(cè)定方法。近年來(lái)酶聯(lián)免疫法(ELISA)和放射免 疫法(CharmII)等生物學(xué)篩選方法得到應(yīng)用，我國(guó)已制定了利用放射免疫 法(CharmII)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中β-內(nèi)酰胺殘留的標(biāo)準(zhǔn)方法，但我國(guó)迄 今為止還沒(méi)關(guān)于動(dòng)物源性食品中β-內(nèi)酰胺殘留ELISA檢測(cè)的方法，更是 沒(méi)有關(guān)于蜂王漿樣品中β-內(nèi)酰胺殘留量的篩選方法。這是因?yàn)橐环矫媸? 蜂王漿所含活性成分多樣，組成復(fù)雜，有大量干擾物質(zhì)，在具體操作時(shí) 更增加了難度和不穩(wěn)定性；另一方面是由于β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物在溶液中極 易降解，制備相應(yīng)的抗體非常困難。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種蜂王漿中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘 留量的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，其實(shí)現(xiàn)對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的快速提取 和測(cè)量。

為此，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：蜂王漿中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量 的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，其步驟如下：

1)蜂王漿樣品中加入體積比為48％-52％的甲醇水溶液，充分混勻；

2)在15±2℃下進(jìn)行高速離心，直至清亮；

3)取上清液加入稀釋洗滌緩沖液；

4)用堿或酸將pH值調(diào)節(jié)到6.5～7.5；

5)用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；

上述的稀釋洗滌緩沖液為檢測(cè)試劑盒自帶或磷酸鹽緩沖液，其pH值 為7.0。

上述的蜂王漿中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，甲醇 水溶液的體積比優(yōu)選50％。

上述的蜂王漿中β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留量的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，所述 的β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物為萘夫西林、氨芐西林、阿莫西林、哌拉西林、阿洛 西林、氯唑西林、盤(pán)尼西林G、雙氯青霉素和苯唑西林。