[發明專利]一種藺草的離體組織培養方法

無效

• 申請號: 200910099340.3
• 申請日: 2009-06-08
• 公開（公告）號: CN101569288A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 許玲;周偉軍;沈偉其;納吉波·悟拉;萬光龍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種藺草的離體組織培養方法。

背景技術

藺草(Juncus?effusus?L.)俗稱席草，原產于亞熱帶，是單子葉植物綱百合花目燈心草科燈心草屬的宿根性沼澤生草本植物。因其莖髓部可作燈心，又名燈心草。藺草圓滑細長，粗細均勻，壁厚心疏，是理想的天然纖維，除編織草席外，還可編織枕席、沙發席、草帽、草籃及拖鞋等。藺草主要是進行無性繁殖的，但出于育種利用和遺傳研究等目的需要進行有性繁殖等研究。

目前通過組織培養和離體誘變的方法來改良藺草產量和品質的研究非常少，通過轉基因和離體誘變獲得抗性和變色藺草以及通過染色體加倍獲得藺草多倍體以提高藺草產量的研究均未見報道。如果能建立一套高效的藺草愈傷誘導、植株再生體系，將很大程度上促進藺草產業的發展，帶來巨大的經濟效益。

發明內容

本發明提供了一種藺草的離體組織培養方法，通過連續繼代和合適劑量的激素實現了藺草離體組織培養中植株的高效再生，該方法操作簡單、植株再生成功率高。

一種藺草的離體組織培養方法，包括以下步驟：

(1)取無菌外植體，接種在MS+0.5～0.55mg·L^-1BA+2～4mg·L^-12，4-D的愈傷誘導培養基中，誘導出愈傷組織；

(2)將愈傷組織接種在MS+0.08～0.12mg·L^-1BA+1.9～2.1mg·L^-12，4-D的愈傷擴繁培養基中進行擴繁；

(3)先將擴繁得到的愈傷組織接種在MS+0.48～0.52mg·L^-1BA+0.98～1.02mg·L^-1KT的植株再生培養基I中10～20天，然后將愈傷組織轉移到MS+0.48～0.52mg·L^-1BA+0.98～1.02mg·L^-1KT+2.98～3.02mg·L^-1IAA的植株再生培養基II中再生，得到藺草再生植株；

(4)將藺草再生植株轉移到1/2MS+0.48～0.52mg·L^-1BA植株增殖培養基中進行擴繁，擴繁后轉移到1/2MS生根培養基誘導生根。

所述的無菌外植體可以采集自無菌苗，也可以是采集田間的經消毒后藺草植株。優選是采集自無菌苗，有利于愈傷誘導。

無菌苗的培養條件優選：將每個含30粒無菌藺草種子的培養皿放在16小時光周期19℃條件下培養7～10天，即可得到藺草實生無菌苗。該條件更適合無菌藺草種子的萌發，可提高種子的萌芽率。

由于藺草種子體積小且質量輕，采用現有的消毒方式無法對其進行徹底消毒，為了提高后續組織培養的成功率，優選的消毒方法為：用0.6～0.65g/L的高錳酸鉀水溶液將藺草種子處理70～75小時后，用無菌水沖洗干凈，接著用質量百分濃度為70～75％的酒精處理55～65分鐘后，用無菌水沖洗干凈，再用19～21g/L的漂白粉精片水溶液處理3～5分鐘后，用無菌水沖洗干凈，然后用質量百分濃度為0.1～0.15％的升汞水溶液處理7～9分鐘后，用無菌水沖洗干凈，即可。

所述的愈傷誘導培養基優選為MS+0.5mg·L^-1BA+2mg·L^-12，4-D。

所述的愈傷擴繁培養基優選為MS+0.1mg·L^-1BA+2mg·L^-12，4-D。

所述的植株再生培養基I優選為MS+0.5mg·L^-1BA+1mg·L^-1KT。

所述的植株再生培養基II優選為MS+0.5mg·L^-1BA+1mg·L^-1KT+3mg·L^-1IAA。

所述的植株增殖培養基優選1/2MS+0.5mg·L^-1BA。

所述的藺草的離體組織培養在本領域常規的實驗環境下進行即可。

步驟(1)中的愈傷誘導一般在19±2℃的黑暗環境中進行，每10天繼代一次，繼代3次后可誘導出愈傷組織。

后續的愈傷擴繁、植株再生和植株擴繁均可在100μmol·m^-2·s^-1光強、光照/黑暗＝16h/8h、19±2℃環境中進行。