[發(fā)明專利]一種米屈肼的高效液相分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910097328.9
• 申請(qǐng)日: 2009-04-07
• 公開（公告）號(hào): CN101858894A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鑒東;任東春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江京新藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;C07C243/40
• 代理公司: 浙江翔隆專利事務(wù)所 33206
• 代理人: 張建青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種米屈肼的高效液相分析方法。

背景技術(shù)

米屈肼由拉脫維亞有機(jī)合成研究所首先研制，由格林代克斯制藥公司90年代上市銷售，有膠囊和注射液兩種劑型，目前該藥在俄羅斯和歐共體國(guó)家廣泛應(yīng)用于臨床，同時(shí)正在日本和美國(guó)申請(qǐng)上市。該藥在我國(guó)尚未生產(chǎn)也未進(jìn)口，國(guó)內(nèi)尚無(wú)完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，文獻(xiàn)報(bào)道有高效液相分析法，其采用的色譜柱填料為氨基鍵合硅膠或氰基鍵合硅膠，但雜質(zhì)分離專屬性均不能令人滿意，且載樣量小，檢測(cè)限均達(dá)不到要求。

文獻(xiàn)方法1(藥物分析雜志、2006，26(3)，358-360)：采用氨基柱(250mm×4.6mm，5um)，以乙腈-水(35∶65)為流動(dòng)相，流速0.8ml/min，蒸發(fā)光檢測(cè)器，100℃，氣流速度2.8ml/min。

該方法使用氨基柱的專屬性并不強(qiáng)，峰形也較差，且因檢測(cè)器的響應(yīng)不高及基線噪音大使雜質(zhì)檢出限達(dá)不到要求，同時(shí)蒸發(fā)光檢測(cè)器對(duì)流動(dòng)相要求較高。

文獻(xiàn)方法2(藥物分析雜志、2006，26(3)，358-360)：采用氰基柱(250mm×4.6mm，5um)，乙腈-0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(用1.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5)(5∶95)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。

該方法使用氰基柱的專屬性還不如氨基柱。

經(jīng)試驗(yàn)以上方法因載樣量較小，0.1％以下的雜質(zhì)不能檢出，不能滿足質(zhì)量控制的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種用一種混合固定相填料來(lái)對(duì)米屈肼進(jìn)行高效液相分析的方法，在離子交換色譜與反相色譜的共同洗脫下，能有效、科學(xué)、便捷的控制米屈肼藥物的有關(guān)物質(zhì)。

為此，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：米屈肼的高效液相分析方法，其特征在于通過高效液相色譜儀采用離子交換色譜和反相色譜法對(duì)米屈肼進(jìn)行共同洗脫，高效液相色譜條件為：所用的色譜柱填料為磺酸基鍵合與十八烷基鍵合的混合填料，兩者的混合比例為1∶4～20，檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm～220nm，流速是0.5ml/min～1.5ml/min。

上述的分析方法，流動(dòng)相的條件為：有機(jī)相為甲醇或乙腈，水相為1～100mmol/L的磷酸鹽緩沖液或高氯酸鹽緩沖液，有機(jī)相與水相的比例為10～50∶90～50。

上述的分析方法，磷酸鹽為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨中的一種或幾種的組合，用磷酸調(diào)pH值至2.5～4.0；高氯酸鹽為高氯酸鈉或高氯酸鉀，用高氯酸調(diào)pH值至2.5～4.0。

結(jié)果顯示，此分析方法可使米屈肼的有關(guān)物質(zhì)米屈肼甲酯、溴及米屈肼降解產(chǎn)物均能在一張色譜圖上檢測(cè)出，且分離度與檢測(cè)限均符合分析要求。

本發(fā)明具有以下有益效果：在離子交換色譜與反相色譜的共同洗脫的條件下，可使米屈肼的有關(guān)物質(zhì)米屈肼甲酯、溴及米屈肼降解產(chǎn)物均能被檢測(cè)出，有效、科學(xué)、便捷的控制了米屈肼藥物的有關(guān)物質(zhì)，為米屈肼有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了一個(gè)有效的方法。

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

附圖說明

圖1為本發(fā)明米屈肼、米屈肼甲酯及溴鹽的分離試驗(yàn)的HPLC圖(圖中的A表示溴鹽，B表示米屈肼，C表示米屈肼甲酯)。

圖2為本發(fā)明米屈肼樣品有關(guān)雜質(zhì)檢驗(yàn)的HPLC圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1?米屈肼的液相分析方法1

取米屈肼樣品(下稱本品)，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml含約20mg的溶液，供測(cè)試。

取米屈肼甲酯溴代物，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml含約0.2mg的溶液，供測(cè)試。

分析色譜柱：磺酸基鍵合與十八烷基鍵合的混合填料，混合比例為1∶4～20或資生堂CAPCELL?PAK?CR色譜柱(型號(hào)：1:4或1:20)；

檢測(cè)波長(zhǎng)：200～220nm，流速：0.5ml/min～1.5ml/min；

流動(dòng)相：10mmol/L磷酸鹽溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1)-乙腈(75∶25)；取10μl注入色譜儀，進(jìn)行分析。

結(jié)果顯示，米屈肼甲酯、丙酸，溴與米屈肼均能在一張色譜圖上檢測(cè)出。且分離度與檢測(cè)限均符合分析要求。

實(shí)施例2?米屈肼的液相分析方法流動(dòng)相試驗(yàn)

取本品，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml含約20mg的溶液，供測(cè)試。

取米屈肼甲酯溴代物，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml含約0.2mg的溶液，供測(cè)試。