[發明專利]塵螨過敏原快速檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 200910096948.0
• 申請日: 2009-03-26
• 公開（公告）號: CN101509920A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發明（設計）人: 吳善東
• 申請（專利權）人: 杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司
• 主分類號: G01N33/551
• 分類號: G01N33/551;G01N33/532;G01N33/52
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及一種檢測人血液中塵螨類過敏原特異性抗體IgE含量的塵螨過敏原快速檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

過敏性疾病(變態反應疾病)被世界衛生組織(WHO)認為是當今世界性的重大衛生學問題，世界各國變態反應疾病的總發病率約為15％-30％，此類疾病包括過敏性哮喘(外源性哮喘)、過敏性鼻炎、過敏性皮炎等，是臨床上的常見病、多發病。

隨著我國醫療衛生事業的發展和人們生活水平的提高，許多嚴重危害人們身體健康的傳染病、寄生蟲病的發病率、死亡率有較大幅度的下降，但人們生活方式的變化和環境污染，過敏性疾病的發病率卻不斷上升，嚴重影響了人們的生活和生存質量。如何防治過敏性哮喘等過敏性疾病是我國醫藥衛生界急需要迫切解決的任務之一。

過敏性疾病是由于人體吸入、食入或接觸過敏原引起的。其中，塵螨是最常見的過敏原(變應原)之一，塵螨過敏占所有過敏性疾病的首位。在哮喘死亡率高的地區，哮喘發作與對塵螨過敏有關，兩者之間存在一定的因果關系。

Voorhorst等早在1964年就報道了屋塵中的過敏原主要來自塵螨，塵螨的分泌物、排泄物及其尸體的降解產物都是引起過敏性疾病的過敏原。引起變態反應主要的塵螨種類有屋塵螨(Dermatophagoides?pteronyssius)、粉塵螨(Dermatophagoides?farinae)等。調查結果顯示：在中國華南地區，最主要的室內塵螨為粉塵螨，其次為屋塵螨。近十幾年來，逐步證實了塵螨過敏原的組成非常復雜，約含有30種以上的過敏原成份。

IgE介導的過敏反應的致敏過敏原檢測在臨床上可以通過皮膚試驗及各種體外檢測方法，如放射性過敏原吸附檢測(RAST)、免疫印跡(IS)及酶免疫分析(EIA)等，結合病史、病癥的問診來確定致敏的過敏原。體外檢測是測定血液樣本中的IgE，特別是過敏原特異性IgE(sIgE)抗體濃度。酶免疫分析中有多種檢測結合酶的方法，即熒光法，化學發光法和免疫層析法等，且均有產品被美國FDA批準(Chapman?JA?et?al，2006，Food?allergy：a?practiceparameter，Ann?Allergy?Asthma?Immunol，96：S1-S68)。美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)專門制定了人IgE抗體免疫分析方法評價的綱要(I/LA20—A，NCCLS，1997，17(20))。使用免疫層析法，僅用少量樣品就可以簡便、快速地檢測塵螨過敏原，通過目測可定性判斷結果，通過使用比色卡可對檢測結果進行半定量分級，通過使用定量金標檢測儀檢測結果進行定量分級，試劑操作方便，既可用于醫院床邊快速診斷，也可用于社區診所或鄉村醫院甚至家庭。尤其適合我國當前的國情。

免疫層析法，采用高度特異性的抗原抗體反應及免疫層析分析技術來定性和半定量檢測血清中的特異性IgE抗體。當固化于硝酸纖維膜載體表面的致敏性抗原與病人血清在一起反應后，血清中特異性IgE就會特異地結合到抗原上，此特異結合的抗體被標記的抗人IgE抗體所識別，顏色的強度與血清中特異性IgE含量成比例；根據人血清中特異性IgE的濃度，評判的過敏原的致敏程度。

免疫層析法應用的多種技術，如塵螨過敏原蛋白的提取純化方法，人IgE抗體和抗人IgE抗體的制備、純化，膠體金標記抗人IgE抗體的制取純化等均已成熟，為塵螨過敏原快速檢測試劑的商品化生產奠定了技術基礎。

發明內容

本發明的目的在于提供一種塵螨過敏原快速檢測試劑盒及其制備方法。

本發明的塵螨過敏原快速檢測試劑盒，其組成包括：置于加樣槽中的已固化了粉塵螨與戶塵螨過敏原蛋白和人IgE抗體的硝酸纖維膜條，膠體金標記的抗體，緩沖液，分級比色卡；

其中：

膠體金標記的抗體：膠體金標記的抗人IgE抗體；

緩沖液：0.05mol/L?pH8.0的Tris—HCl中含2％胎牛血清，0.15mol/L?NaCl，0.5％?Tween-20和20mg/L慶大霉素；

分級比色卡：根據國際上通用的特異性IgE抗體濃度和分級標準關系制作的分級比色卡。

本發明中的分級比色卡的顏色強度與血清中特異性IgE含量成比例，隨特異性IgE濃度的升高，顏色逐漸變深。

本發明的塵螨過敏原快速檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

1)粉塵螨與戶塵螨過敏原蛋白的制備：將含粉塵螨與戶塵螨過敏原蛋白的飼養塵螨經粉碎、脫脂、提取、SDS-PAGE電泳確證、洗脫、干燥；

2)膠體金標記抗體的制備：用膠體金標記抗人IgE抗體；