[發明專利]一種檢測馬凡綜合癥的試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 200910095564.7
• 申請日: 2009-01-22
• 公開（公告）號: CN101481743A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發明（設計）人: 孫朝暉;金沖飛;姚克
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬第二醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司
• 代理人: 王洪新

技術領域

本發明涉及一種產前診斷馬凡綜合癥的方法，特別是一種利用多重聚合酶鏈 式反應(PCR)和單堿基延伸反應的馬凡綜合癥的產前診斷方法，還涉及一種用于 本發明診斷方法的試劑盒。

背景技術

馬凡綜合癥(Marfan?syndrome；MFS)是最常見的遺傳性結締組織疾病之一， 主要累及骨骼、眼部和心血管系統。其臨床特征為：軀體異常，如體格細高，四 肢及指(趾)細長，被稱為蜘蛛樣指(趾)；眼部晶狀體脫位；關節松弛；心臟大 血管病變，如主動脈根及升主動脈瘤樣擴張以及急性或慢性主動脈內膜破裂，形 成夾層動脈瘤。另外，還有硬腦脊膜擴張、高腭弓、漏斗胸或雞胸以及肺和神經 系統畸形等一系列綜合征象。但是，這一綜合癥的臨床表現也可以是不完全顯性 的，如缺少心臟大血管的典型表現者，常被稱為隱性馬凡綜合癥。

馬凡綜合癥是一種常染色體顯性遺傳性疾病，人群發病率大約為1/10000， 按此比例推算，中國有馬凡綜合癥病例13萬之多。馬凡綜合癥多有家族史，約 15％～25％為散發病例，在種族和性別上，發病沒有明顯差異。馬凡綜合癥患者 的父母中有75％可診斷出患有該病，馬凡綜合癥患者子女的發生率約為50％。當 父母均不是患者的情況下，如果第一個子女是馬凡綜合癥患者，那么他們再生育 一小孩時，由于存在種群鑲嵌現象，該小孩的發病率會高于人群的平均水平。據 報道，有1/3的馬凡綜合癥患者死于32歲以前，2/3死于50歲左右，其平均 年齡僅40歲；其死亡的主要原因絕大多數是心血管病變造成的。最常見的癥狀 是主動脈瘤破裂、心包壓塞或主動脈瓣關閉不全和二尖瓣脫垂而致的心力衰竭或 心肌缺血。

為了能在孕早期或孕中期對異常兒做出診斷，及時治療或處理。目前，可以 進行產前診斷的疾病類型主要有染色體病(300多種)，X連鎖遺傳病(70余種)， 先天性代謝缺陷病(新生兒先天性代謝病的發生率約8‰)和先天畸形。其中， 染色體異常的遺傳病，比如唐氏綜合癥，特納綜合癥等，一般表現為染色體片段 的重復和缺失，以及染色體的非整倍性(如多一條額外的染色體，如唐氏綜合癥 者多一條額外的21號染色體，故亦稱為21三體綜合癥)。通過多種方法對染色體 染色，可以檢測出以上染色體缺陷。目前這些方法已經應用于臨床，通過檢測胎 兒是否帶有異常染色體來進行優生，為患染色體遺傳病的家系帶去了福音，也大 大減輕了社會的經濟負擔。然而，對于馬凡綜合癥，其基因缺陷是在堿基水平的， 表現為堿基的點突變，無義突變，剪接位點突變，終止密碼子的突變等，用染色 體的方法是無法達到檢測目的的。而常規的產前B超檢查也難以發現胎兒的異常， 這給優生帶來了很大的挑戰。一個患兒的出生不僅給家庭，還給社會帶來了沉重 的負擔。因此，尋找一種檢測馬凡綜合癥的試劑盒具有重要的意義。國內外目前 也還未見切實有效制備該試劑盒的方法的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述背景技術的不足，提供一種操作簡便、 設備簡單、結果準確度高的檢測馬凡綜合癥的試劑盒；同時，本發明還提供一種 利用多重聚合酶鏈式反應(PCR)和單堿基延伸反應制備該試劑盒的方法。

本發明采用的技術方案是：

一種檢測馬凡綜合癥的試劑盒，其特征在于：包括特異性引物、多重PCR反 應擴增液、潔凈液、單堿基延伸反應液，所述的特異性引物包括每條含18-25個 堿基的六對或六對以上多重PCR擴增引物和與檢測位點相匹配的含40-45個堿基 的突變檢測引物，其中突變檢測引物由5’端的地址序列和3’端的突變檢測區組 成。

所述的多重PCR引物序列如下：

1、TTTTTGTTTTAGACCCAATGTCT，

GACAATACACTGATTTCCGCC；

2、AAATAACTACAGATCAACTCCTGTGAG，

TTTCTGGCATAGACACTGATCG；

3、TGGCTGTCTCAATGGAGG，

ATTTTAAAAACCATTACCTCTTTCAC；

4、TTGATTTTAGACATTGATGAGTGTT，

CGCATTACACACGCAATGAAA；

5、TAATAAGTGCCTTTCTCTGCCA，

GGGAAGCATTCACATCTGTAG；

6、AAGATTCTGCCTGATGCTTTT，