[發(fā)明專利]大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α和γ基因序列

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910095204.7
• 申請日: 2009-01-05
• 公開（公告）號: CN101544980A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發(fā)明（設計）人: 吳天星;趙占宇;唐宏剛
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 周 烽

技術領域

本發(fā)明屬于生物基因領域，尤其涉及大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α和γ基因序列。

背景技術

過氧化物酶體增殖物受體(peroxisome?proliferator-activatived?receptors，PPARs)是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，屬II型核受體家族成員。近年來許多研究表明PPARs在動物脂肪細胞分化和脂肪代謝中起著重要作用。PPAR分為三種亞型，即PPARα、β、γ，PPARα主要在肝細胞表達，可能主要參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；PPARγ主要在脂肪細胞表達，參與脂肪細胞分化及其成脂作用；而PPARβ分布廣泛，可能與細胞的基礎脂質(zhì)代謝有關，也可能起到協(xié)助PPARα、γ的作用。PPAR在介導脂肪酸氧化及脂肪代謝中起重要作用，其靶基因均與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運和代謝途徑有關。過氧化物酶體增殖物反應元件(peroxisome?proliferatorresponse?element，PPRE)常位于脂質(zhì)代謝相關蛋白或酶基因的上游，如編碼脂肪酸結合蛋白、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、脂蛋白脂酶、過氧化物酶體脂肪酸氧化酶系及脂酰CoA去飽和酶等基因。PPARs與PPRE結合可激活上述基因表達，表明PPAR參與脂質(zhì)代謝的許多環(huán)節(jié)。PPAR是調(diào)控肝臟脂肪酸氧化酶基因表達的轉(zhuǎn)錄因子，PPAR上調(diào)各種脂肪細胞蛋白包括解偶聯(lián)蛋白1與脂蛋白脂酶的基因表達。PPARα的靶基因是一組相對同類的基因，它們參與了脂質(zhì)分解代謝的幾個方面：如脂肪酸的透膜吸收、脂肪酸在細胞內(nèi)的結合、脂肪酸的氧化(在微球蛋白、過氧化物酶體和線粒體中)和脂蛋白的合成與運輸。PPARα可以調(diào)節(jié)若干線粒體脂肪酸催化酶的表達，通過誘導肌肉和肝臟特異性的肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)運酶表達而調(diào)控脂肪酸向線粒體的轉(zhuǎn)運，刺激β-氧化過程，降低脂肪酸和甘油三酯合成。PPARγ是脂肪組織發(fā)育的中心調(diào)控劑，其信號通路影響細胞和系統(tǒng)脂肪代謝。它能夠誘導肝細胞表達載脂蛋白、脂肪酸氧化酶系與脂蛋白脂酶等，從而促進脂質(zhì)的氧化代謝，降低血脂濃度。PPARγ的活化能夠選擇性誘導與脂肪酸吸收相關的基因在脂肪組織的表達，如脂蛋白脂酶、脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白與酰基CoA合成酶基因等，但并不改變這些基因在肌肉組織中表達，從而導致脂肪酸在肌肉組織中的相對缺失。

大黃魚(拉丁文名為：Pseudosciaena?crocea，Richardson，可簡寫為Pseudosciaena?crocea，R.或P.crocea)是中國重要的海水經(jīng)濟魚類品種之一，養(yǎng)殖大黃魚由于飼料營養(yǎng)價值不高而造成體內(nèi)脂肪含量增加，降低了魚肉的瘦肉率。通過對PPAR基因表達的調(diào)控可以改善大黃魚體內(nèi)的脂肪代謝過程，對提高魚類的肌肉品質(zhì)具有重大的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α和γ基因序列。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α和γ基因序列，它們分別具有SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的基因序列。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α和γ的基因克隆及其熒光定量方法，為探討大黃魚肝臟脂肪代謝的分子作用機制提供了理論基礎，并對其他石首魚科魚類的肝臟PPARα和γ基因的克隆和表達提供了借鑒作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的PCR電泳圖；

圖2為大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的α基因序列圖；

圖3為大黃魚肝臟過氧化物酶體增殖物受體PPAR的γ基因序列圖；

圖4為表示PPARα和γ基因的表達水平隨著日糧中共軛亞油酸含量的增加而顯著升高的圖，圖中，*表示差異顯著(P<0.05)。

具體實施方式

本發(fā)明首先設計四對簡并性引物，然后從大黃魚肝臟中提取RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA作為模板，通過兩輪PCR反應獲取大黃魚肝臟PPARα和γ基因片段，經(jīng)過連接和轉(zhuǎn)化反應后，檢測得：PPARα具有SEQ?ID?No.1所示的基因序列，PPARγ具有SEQ?ID?No.2所示的基因序列。

下面根據(jù)附圖詳細說明本發(fā)明，本發(fā)明的目的和效果將變得更加明顯。

1、所用材料

大黃魚：成年大黃魚(約300g重)，由浙江省象山港寧波海灣水產(chǎn)養(yǎng)殖繁育中心提供，肝臟取出后液氮凍存?zhèn)溆谩?/p>