[發明專利]動物蟲媒病多重RT-PCR鑒別檢測試劑及制備方法和應用

有效

• 申請號: 200910094767.4
• 申請日: 2009-07-27
• 公開（公告）號: CN101724712A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 花群義;阮周曦;曾少靈;張彩虹;陶虹;孫潔;曹琛福;呂建強;盧體康;林慶燕
• 申請（專利權）人: 花群義
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 云南派特律師事務所 53110
• 代理人: 張怡

技術領域

本發明涉及生物技術領域。尤其是一種能夠同時鑒別檢測四種動物蟲媒病的試劑，以及這 種試劑的制備方法和應用。

背景技術

藍舌病(Bluetongue?disease，BLU)是由呼腸孤病毒科(reoviridae)環狀病毒屬(Obivirus genus)的藍舌病病毒(Bluetongue?virus，BTV)引起的一種烈性動物傳染病，由庫蠓傳播，主要 危害綿羊、山羊、牛等家畜，并在世界范圍內廣泛流行，世界動物衛生組織(World?organisation for?animal?health，OIE)將BLU列為重要動物傳染病。在很多國家動物貿易協定中，BLU是必 須進行檢疫的傳染病之一。近年來，隨著氣候變暖，BLU在歐洲許多國家的發病率增加，嚴重 影響著國際動物貿易。BTV共有24個血清型，BTV基因組含有10個雙鏈RNA片段(dsRNA)， 由19218bp組成，編碼7種結構蛋白(VP1-VP7)和4種非結構蛋白(NS1、NS2、NS3和NS3A)， 7種結構蛋白的4種形成雙層蛋白衣殼，外殼主要由VP2和VP5構成，而內殼主要由VP3和 VP7構成。VP7是核芯衣殼表面殼粒的主要成分，約占病毒總蛋白的1/3，是病毒可溶性群 特異性抗原。VP7基因也是BTV群特異性分子檢測的靶基因。

鹿流行性出血病(epizootic?haemorrhagic?disease?of?deer，EHD)是一種季節性、非接觸性的 病毒性傳染病。鹿流行性出血病病毒(EHDV)也是呼腸孤病毒科(Reoviridae)環狀病毒屬 (Orbivirus)的成員，是通過節肢動物(主要是庫蠓)傳播的雙股RNA病毒。在自然條件下，鹿 流行性出血病病毒可引起牛、綿羊等家畜及白尾鹿、糜、大角羚羊等多種馴養和野生反芻動物 感染。臨床特征為體溫短暫升高，呈休克癥狀，粘膜和漿膜出血，于昏迷狀態下死亡。病變呈 廣泛性充血、出血、嚴重水腫和血管壞死，有時出現腹膜水腫。目前EHD共發現8個血清型， 分別是EHDV-1、EHDV-2、EHDV-3、EHDV-4，EHDV-5、EHDV-6、EHDV-7、EHDV-8等。 EHDV在形態結構上與藍舌病病毒極為相似，血清學上與藍舌病有明顯交叉，其VP7蛋白是病 毒可溶性群特異性抗原，VP7基因也是EHDV群特異性分子檢測的靶基因。本病目前尚無有效 疫苗和治療措施，控制和消滅EHD必須花費大量的人力物力，出口貿易也因此受限，給EHDV 流行的國家帶來很大的經濟損失。EHDV的快速檢測方法和試劑是動物檢疫中急需解決的關鍵 技術問題。

水泡性口炎(Vesicular?stomatitis，VS)是由水泡性口炎病毒(VSV)引起的牛、豬、馬、鹿 等多種動物和人感染的一種病毒性人畜共患病。VSV屬于彈狀病毒科水泡病毒屬的病毒。分為 兩個血清型：新澤西型(VSV-NJ)和印第安那型(VSV-IND)。它是牛、豬、馬的流行性和散 發性疾病，還可感染其它許多哺乳動物。人對此病毒易感，可產生類似流感樣癥狀和口腔、手 足的水泡。牛、豬、馬感染后引起嚴重的口腔粘膜、乳頭皮膚及蹄冠皮膚出現水泡及糜爛，造 成巨大的經濟損失。臨床癥狀與口蹄疫(FMD)、水泡病(SVD)和水泡疹(VE)很相似，不 易區別。

赤羽病是由赤羽病病毒(Akabane?virus，AKV)引起的牛、羊等動物流產、死產、死胎、胎兒 畸形、以及先天性關節彎曲一積水性無腦綜合征的一種動物蟲媒傳染病。1990年時證實該病在 我國存在。赤羽病病毒屬于布尼病毒科(Bunyaviridae)布尼病毒屬辛布(simbu)病毒血清群的一個 亞群，為單股負鏈RNA病毒。目前，赤羽病的診斷主要通過病毒分離、瓊脂免疫擴散試驗(AGID)、 中和試驗和ELISA試驗等方法。AKA給畜牧業造成了嚴重的經濟損失，是我國動物疾病防制 和國際動物貿易中的重點檢疫對象。因此有必要加強對該病的研究與檢測監控，防止該病在我 國的發生、傳播和大規模流行。