[發(fā)明專利]高溫木聚糖酶的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910094340.4
• 申請日: 2009-04-13
• 公開（公告）號: CN101525607A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設計）人: 李文均;胡松楠;魏云林;唐蜀昆;趙立興;姜成林;徐麗華
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12R1/01
• 代理公司: 云南派特律師事務所
• 代理人: 張 怡

1.一種高溫木聚糖酶的制備方法，其特征在于由以下步驟組成：

一、粗酶液的制備：將Thermobifida?halotolerans?YIM?90462^T以5-10％的體積百分比的接種量接入液體種子培養(yǎng)基中，在37～45℃的條件下振蕩培養(yǎng)至指數生長期，將處于指數生長期的菌液以5-10％的體積百分比的接種量轉接于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有質量體積百分比為0.1-2％的AVICEL，在37～45℃培養(yǎng)至穩(wěn)定期初期，將發(fā)酵液離心，取上清液，濾紙過濾，得粗酶液；

二、用截留分子量為10KDa的超濾膜包將粗酶液的體積濃縮至原來的1/6；

三、濃縮后的酶液加硫酸銨至30％飽和度，離心取上清液，繼續(xù)加硫酸銨至50％飽和度，離心取沉淀，溶解在pH8.0、0.3M硫酸銨的Tris-HCl緩沖液中；

四、將步驟(三)所得液離心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸銨的Tris-HCl緩沖液平衡好的Butyl-Sepharose層析柱，將透過峰按保留時間的先后分別收集，直至緩沖液流過8-10個層析柱體積，保留有木聚糖酶活性的透過峰酶液部分；

五、將步驟(四)所得液離心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸銨的Tris-HCl緩沖液平衡好的Phenyl-Sepharose層析柱，用無硫酸銨pH8.0的Tris-HCl緩沖液洗脫，收集所有洗脫峰組分；

六、將步驟(五)所得液離心取上清液，加到pH8.0的Tris-HCl緩沖液平衡好的Q-Sepharose層析柱，用含NaClpH8.0的Tris-HCl緩沖液洗脫，首先使洗脫液電導達到30mS/cm，將洗脫峰按保留時間的先后收集，直至緩沖液流過5-10個層析柱體積，保留有木聚糖酶活性的部分，即為本發(fā)明產品。