[發(fā)明專利]一種防治煙草粉螟的生防菌劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910094136.2
• 申請日: 2009-02-27
• 公開（公告）號: CN101558765A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發(fā)明（設計）人: 高家合;劉勇;宋春滿;李天飛;鄧云龍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草科學研究所
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P7/04;C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發(fā)明涉及一種防治煙草粉螟的生防菌劑。屬微生物技術領域。

背景技術：

煙草粉螟Ephestia?elutella(Hübner)，屬鱗翅目螟蛾科。在煙葉倉庫害蟲中是僅次于煙草甲的倉貯害蟲。煙草粉螟廣泛分布于世界熱帶及溫帶地區(qū)，國內(nèi)分布于遼寧、甘肅、云南、貴州、四川、湖南、湖北、河南及江蘇等地。在云南，煙葉倉庫害蟲以煙草粉螟為害最重，資料統(tǒng)計表明，每年因這種害蟲造成的貯煙量損失占總貯量的0.5％～1％。煙草粉螟以幼蟲危害煙葉，成蟲不吃食物。幼蟲喜吃含糖高、尼古丁低的烤煙和香料煙。

目前，防治煙葉倉庫害蟲主要應用熏蒸劑(如磷化鋁)薰蒸。但是近年來，國內(nèi)外對環(huán)境保護日益重視，要求減少和禁止使用劇毒薰蒸劑的呼聲高漲，氰化氫、溴甲烷、磷化鋁等已相繼被禁用。在煙葉倉庫中使用磷化鋁，由于操作不當易造成火災，且倉庫需要良好的密封性能。由于人類對環(huán)境保護及自身健康意識的增強，生物防治已成為人們研究的熱點。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的主要目的在于克服現(xiàn)有技術之不足，而提供一種使用安全、煙葉及環(huán)境污染低的防治煙草粉螟的生防菌劑，為煙葉的貯存提供技術支持。

本發(fā)明采用的是蘇云金桿菌科爾默亞種Bacillus?thuringiensis?subsp.colmer菌株5，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院；保藏日期：2009年2月6日；保藏登記入冊的編號CGMCCNO.2895。菌株5屬于蘇云金桿菌，系本發(fā)明人從大量復烤煙葉里分離出的蘇云金桿菌中篩選出來的，對煙草粉螟具有較好防治效果。本發(fā)明人通過13項生理生化試驗結果與已知的29個蘇云金桿菌亞種的生理生化指標比較，鑒定為科爾默亞種colmer，血清型H₂₁。

本發(fā)明的生物菌劑經(jīng)如下工藝制成：

試管種子培養(yǎng)：將菌株5接種到試管斜面培養(yǎng)基上，試管斜面培養(yǎng)基(重量百分比)配方為：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，瓊脂2.0％，氯化鈉0.5％，pH8.0；30℃恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種子。

液體發(fā)酵：采用試管培養(yǎng)的蘇云金桿菌菌株5原種，按三角搖瓶→種子罐→發(fā)酵罐的三級工藝培養(yǎng)。在30L發(fā)酵罐中，裝入20L液體發(fā)酵培養(yǎng)液，液體培養(yǎng)基(重量百分比)配方為：玉米粉0.5％、黃豆粉2.0％、酵母粉0.15％、魚粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氫鉀0.25％、碳酸鈣0.05％和硫酸鎂0.035％、0.025％植物油作消泡劑，初始pH值為7.5。經(jīng)0.05mpa滅菌30分鐘，冷卻至室溫接入1.8L菌株5液體種子，接種量為9％(體積比)，發(fā)酵溫度為30℃，通氣量為15％(體積比)，攪拌速度為150r/min，發(fā)酵時間為36h。

制備生防菌劑：將經(jīng)液體發(fā)酵后的培養(yǎng)液在5℃溫度下，用高速離心機5000g離心20分鐘，去除上清液→離心后的沉淀物用凍干超濾儀在室溫下凍干→粉碎成粉得到生防菌劑，生防菌劑(粉劑)的活芽孢數(shù)為4.76×10¹⁰個/ml。

本發(fā)明的生防菌劑具有使用安全、煙葉及環(huán)境污染低的優(yōu)點，能廣泛用于煙葉貯存中煙草粉螟的生物防治。

具體實施方式：

一、生防菌劑的制備

本發(fā)明的生物菌劑經(jīng)如下工藝制成：

試管種培養(yǎng)：將菌株5接種到試管斜面培養(yǎng)基上，試管斜面培養(yǎng)基(重量百分比)配方為：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，瓊脂2.0％，氯化鈉0.5％，pH8.0；30℃恒溫培養(yǎng)2天，獲得試管種。

液體發(fā)酵：采用試管培養(yǎng)的蘇云金桿菌菌株5原種，按三角搖瓶→種子罐→發(fā)酵罐的三級工藝培養(yǎng)。在30L發(fā)酵罐中，裝入20L液體發(fā)酵培養(yǎng)液，液體培養(yǎng)基(重量百分比)配方為：玉米粉0.5％、黃豆粉2.0％、酵母粉0.15％、魚粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氫鉀0.25％、碳酸鈣0.05％和硫酸鎂0.035％，0.025％植物油作消泡劑，初始pH值為7.5。經(jīng)0.05mpa滅菌30分鐘，冷卻至室溫接入1.8L菌株5液體種子(接種量為9％)，發(fā)酵溫度為30℃，通氣量為15％，攪拌速度為150r/min，發(fā)酵時間為36h。

制備生防菌劑：將經(jīng)液體發(fā)酵后的培養(yǎng)液在5℃溫度下，用高速離心機5000g離心20分鐘，去除上清液→離心后的沉淀物用凍干超濾儀在室溫下凍干→粉碎成粉得到生防菌劑，生防菌劑(粉劑)的活芽孢數(shù)為4.76×10¹⁰個/ml。

二、本發(fā)明生防菌劑防治煙草粉螟的功能試驗

1、菌株5對幼蟲生長發(fā)育的影響