[發明專利]丫蕊花組培及種植方法

有效

• 申請號: 200910094057.1
• 申請日: 2009-01-23
• 公開（公告）號: CN101473792A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 賀樹珍;陳昌祥;劉海洋;倪偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00;A01G31/00
• 代理公司: 云南協立專利事務所
• 代理人: 謝 嘉

技術領域：

本發明屬于植物組織培養和移栽種植技術領域，具體地，涉及百合科植物丫蕊花新藥材的組織培養技術和無公害種植方法。

背景技術：

丫蕊花植物在民間稱石鳳丹、隨身丹，具有清熱、解毒、散結、利小便，主治癆癘、水腫，該屬植物有四種，分別為丫蕊花(Y.thibetica)；云南丫蕊花(Y.yunnanensis?var.micranthaHand-Mazz)；高山丫蕊花(Y.alpina?wang?et?Tang)；小丫蕊花(Y.cavaleriei?Levl?et?Vant)，均屬于在國內市場未上市的中藥，已被云南省食品藥品監督管理局列入云南省中藥材標準，2005年版彝族藥(III)于2009年發布。現為天然植物。中國專利CN1081036C公開了以丫蕊花全草為原料，提取獲得呋甾類甾體皂苷具有抗癌活性，該發明專利亦被收載于美國化學文摘(Kawabc.et.al.CS?1996，124：325368y)。中國專利為03117694.1公開了丫蕊花屬植物中甾體皂苷具有治療婦科出血性疾病的作用。

制藥企業用丫蕊花為原料生產治療婦科血癥的新藥后，市場上供應丫蕊花中藥材預計每年不低于4000-5000噸。僅依靠野生丫蕊花資源，無法解決和滿足消耗的需要。急需種植，實現丫蕊花資源的再生和持續利用。

由于丫蕊花花粉管由珠孔進入胚囊釋放出兩個精子屬雙受精過程，受精后的合子休眠期較長，胚胎發育較慢，種子成熟時胚尚未分化，胚仍需進一步緩慢發育，所以用種子繁殖沒能成功，野外在丫蕊花周囲也未發現幼小丫蕊花。為此中國專利申請“一種丫蕊花的人工繁育方法”專利申請號為200610048655.1，公開了以丫蕊花葉為材料進行人工繁殖技術研究獲得成功，出苗率最高達67％。然而該技術由于出苗率最高僅達67％，出苗率還是較低，而且該方法人工種植需要土地，遮蔭費時且投入大，不能滿足大面積種植和對藥材的大量需求。

發明內容：

針對現在技術的上述不足，本發明提供一種丫蕊花組織培育和無公害種植技術，采用本發明的方法，可獲得大批組培苗滿足種植需要；并采用天然林區種植克服農藥及重金屬污染，成活率達95.5％，三年內可提供新藥材，單株重量高于同年野生和無繁種植藥材2倍，并且縮宮止血有效成分含量高于同年野生藥材；并滿足制藥企業對原藥材的需求，既可成批培育又可大面積種植組培苗，并且提早二年獲得無公害藥材，具有實用價值。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下的技術方案：

丫蕊花的組培及種植方法，包括取丫蕊花外植體，消毒清洗，愈傷組織誘導與分化，不定芽增殖，不定根誘導，煉苗，無公害種植步驟。

所述組織培養育苗是用葉組織離體培養育苗，剪下葉片，消毒后接種在MS培養基上培養30天，形成愈傷組織并分化為叢芽，培養的不定芽單個切開轉接在培養基上增殖培養，形成增殖體的幼苗轉接到1/2MS+IBA?0.2mg/L的培養基中，15-21天生根，練苗后移栽。

丫蕊花外植體優選葉片，經水洗，70％的乙醇和升汞消毒，無菌水洗凈后，剪成小塊，進行愈傷組織誘導與分化。

愈傷組織誘導與分化是在無菌條件下，從丫蕊花消毒后葉片上剪下1平方厘米小葉塊，接種在MS培養基加含6-BA?0.25-0.5mg/L，NAA?0.2-0.3mg/L培養基上，在20-25℃，光照1000Lx，光照10-12小時，濕度大于70％條件下直接誘導產生叢芽，30-40天開始萌動；再經8-14天有叢芽出現；7-15天叢芽長葉。

不定芽增殖是將愈傷組織誘導與分化出的叢芽單個切開，在MS培養基加含6-BA?0.5mg/L，NAA?0.3-0.4mg/L培養基上進行增殖培養；40-60天便可形成幼苗；增殖培養產生的新叢芽，葉變綠，2-3cm時，進一步轉接進行增殖培養或繼代培養。

不定根誘導是取出增殖培養長出的高4-5cm的幼苗，單個切開，轉接到1/2MS+IBA?0.2mg/L培養基中，轉接后15-21天，開始生根；待40-60天根達3條以上，葉達6-10片，高達6-8cm的試菅苗取出練苗。

煉苗是將試菅苗從組培室取出后置于溫棚中，放置5-7天，取出幼苗洗凈培養基后移植在裝有腐質土和紅土1∶1并加少許腐質葉為基質的營養袋內，澆水，在1000-2000Lx中光照8-12小時，濕度大于70％條件下練苗1個月，當葉達6-10片，高達6-8cm時移栽種植。