[發明專利]非病毒載體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 200910093081.3
• 申請日: 2009-09-28
• 公開（公告）號: CN102030754A
• 公開（公告）日: 2011-04-27
• 發明（設計）人: 黃文林;張超;高詩娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C07D475/04
• 分類號: C07D475/04;C08G65/48;C08G81/00;A61K47/34;A61K48/00;A61P35/00;A61P9/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.式I所示化合物，

2.一種制備權利要求1所述化合物的方法，包括如下步驟：在惰性氣氛中，將葉酸與三乙胺混勻至完全溶解后，在避光及惰性氣氛的條件下，再加入N羥基琥珀酸胺酯和N，N′-二環己基碳二亞胺進行反應，得到權利要求1所述化合物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述葉酸、三乙胺的摩爾比為2-2.5∶30-40，優選2.26∶36，反應溫度為25-30℃，優選28℃，反應時間為12-16小時，優選14小時；所述N羥基琥珀酸胺酯與葉酸的摩爾比為2-2.5∶2-2.5，優選2.26∶2.26，N，N′-二環己基碳二亞胺與葉酸的摩爾比為的2-2.5∶2-2.5，優選2.26∶2.4，反應時間為45-50小時，優選48小時；反應溫度為25-30℃，優選28℃；反應介質選自無水二甲基亞砜和無水N，N-二甲基甲酰胺中的至少一種。

4.式II所示化合物，

5.一種制備權利要求4所述化合物的方法，包括如下步驟：在避光及惰性氣氛的條件下，將權利要求1所述化合物與三乙胺、2-巰基乙胺鹽酸鹽進行反應，得到權利要求4所述化合物。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：所述權利要求1所述化合物與2-巰基乙胺鹽酸鹽的摩爾比為0.55-0.60∶0.60-0.65，優選0.56∶0.62；所述三乙胺與2-巰基乙胺鹽酸鹽的用量比為2mL-4mL∶60mg-80mg；反應溫度為25-30℃，優選28℃，反應時間為15-20小時，優選18小時；反應介質選自無水二甲基亞砜和無水N，N-二甲基甲酰胺中的至少一種。

7.式III所示化合物，

8.一種制備權利要求7所述化合物的方法，包括如下步驟：將權利要求4所述化合物、式IV所示化合物與三乙胺進行反應，得到權利要求7所述化合物；

所述式IV化合物的分子量為3500±350Da。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述權利要求4所述化合物與式IV所示化合物的摩爾比為0.112-0.118∶0.055-0.060，優選0.115∶0.057；所述三乙胺與所述式IV化合物的用量比為0.01mL-0.03mL∶0.055mol-0.060mol，優選0.02mL∶0.057mol；反應溫度為30-40℃，優選35℃；反應時間為45-50小時，優選48小時；反應介質為pH值為7.2～7.4的磷酸鹽緩沖溶液；其中，所述磷酸鹽緩沖溶液中，NaCl的濃度為137mmol/L，KCl的濃度為2.7mmol/L，Na₂HPO₄的濃度為4.3mmol/L，KH₂PO₄的濃度為1.4mmol/。

10.式V所示化合物，

其中，m＝145，n為小于m的正整數。

11.根據權利要求10所述的化合物，其特征在于：式V所述化合物的相對數均分子量為20600，分子量分布為1.73。

12.一種制備權利要求10或11所述化合物的方法，包括如下步驟：將權利要求7所述化合物與式VI所示化合物進行反應，得到權利要求10或11所述化合物；

式VI中，m＝145，n為小于m的正整數，式VI所示化合物的相對數均分子量為25000Da。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于：所述權利要求7所述化合物與式VI所示化合物的質量比為56-60∶315-325，優選59.6∶320；反應介質選自二甲基亞砜和N，N-二甲基甲酰胺中的至少一種；反應的溫度為30-40℃，優選35℃；反應的時間為6-48小時，優選48小時。

14.一種非病毒載體，是聚乙烯亞胺與權利要求10或11所述化合物共混而得的納米顆粒。

15.根據權利要求14所述的載體，其特征在于：所述納米顆粒的粒徑為70-90納米；所述聚乙烯亞胺與權利要求10所示化合物的摩爾比為10-15∶85-90；所述聚乙烯亞胺的分子量為25kDa；共混的溫度為20-30℃，共混的時間為15-20分鐘。