[發明專利]一種花臉蘑蛋白LsAPII及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 200910093039.1 | 申請日： | 2009-09-25 |
| 公開（公告）號： | CN101665531A | 公開（公告）日： | 2010-03-10 |
| 發明（設計）人： | 燕繼曄;李興紅;周瑩;嚴紅;馬鳳金 | 申請（專利權）人： | 北京市農林科學院 |
| 主分類號： | C07K7/08 | 分類號： | C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;A01N37/46;A01P1/00 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 | 代理人： | 胡長遠 |
| 地址： | 100097北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 花臉 蛋白 lsapii 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種抗植物病毒的花臉蘑蛋白LsAPII，所述花臉蘑蛋白來自花臉蘑 (Lepista?sordida)，其N端氨基酸序列為：DGEYVNDLEGTISVDA；經SDS聚丙 烯酰胺凝膠電泳鑒定，所述花臉蘑蛋白LsAPII的分子量為17.8KD；所述的花 臉蘑蛋白LsAPII，按照如下方法制備：
(1)、將花臉蘑子實體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml 中浸泡2h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50％，在4℃放置 8h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70％，在4℃放置 8h，10000rpm離心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀，然后經3 倍重量的重蒸餾水透析8小時，將透析得到的透析液分別用Millipore公司生 產的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進行超濾截留，留取分子量在9～ 90KD的蛋白溶液；
(5)將步驟(4)所得蛋白溶液經陰離子交換柱分離，用0.3mol/L的氯 化鈉洗脫，收集洗脫液，洗脫液中所含物質即為花臉蘑蛋白LsAPII。
2.權利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII的制備方法，包括如下步驟：
(1)、將花臉蘑子實體粉末2g加入到0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液20ml 中浸泡2h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(2)、向步驟(1)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為50％，在4℃放置 8h，10000rpm離心25min，棄沉淀，取上清液；
(3)、向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為70％，在4℃放置 8h，10000rpm離心25min，收取沉淀；
(4)、用0.025M、pH8.0的磷酸緩沖液溶解步驟(3)所得沉淀，然后經3 倍重量的重蒸餾水透析8小時，將透析得到的透析液分別用Millipore公司生 產的Amicon?Ultra-153KD和30KD的超濾管進行超濾截留，留取分子量在9～ 90KD的蛋白溶液；
(5)將步驟(4)所得蛋白溶液經陰離子交換柱分離，用0.3mol/L的氯化 鈉洗脫，收集洗脫液，洗脫液中所含物質即為花臉蘑蛋白LsAPII。
3.權利要求1所述的花臉蘑蛋白LsAPII在防治煙草花葉病毒病上的應用。
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