[發明專利]提取超氧化物岐化酶的方法和試劑盒有效

申請號：	200910092875.8	申請日：	2009-09-09
公開（公告）號：	CN102021151A	公開（公告）日：	2011-04-20
發明（設計）人：	董先智;王保全;李昭華	申請（專利權）人：	中國科學院生物物理研究所
主分類號：	C12N9/02	分類號：	C12N9/02
代理公司：	中科專利商標代理有限責任公司 11021	代理人：	王旭
地址：	100101***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	提取超氧化物岐化酶方法試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種提取蛋白質的方法和試劑盒，具體地，一種提取超氧化物岐化酶(SOD)的方法和試劑盒。

背景技術

超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)簡稱SOD，是一種廣泛存在于動、植物及微生物中的金屬酶，它至少可分為以下三種類型：CuZn-SOD(微藍綠色)、Mn-SOD(微粉紅色)、Fe-SOD(微淡黃色)。

SOD是一種氧自由基清除劑，它的存在與人體衰老延緩、腫瘤的預防、自身免疫力和防護輻射能力有著密切的關系。目前臨床上主要運用SOD延緩機體衰老，保護機體免疫功能，防止和消除色素沉著，消除局部炎癥，由于它無抗原性、無毒副作用，被廣泛應用于食品、藥品、化妝品和保健品等領域[1]。

現有的SOD純化過程中，粗分級工藝是不可避免的環節，其中必須使用大量的有機溶劑(如乙醇，氯仿等)或無機鹽(如硫酸銨，磷酸鹽等)，通過有機溶劑和無機鹽的分級沉淀以去除大部分雜蛋白，獲得粗品SOD。然后才能使用后續工藝，如丙酮沉淀、超濾濃縮、透析、柱層析等，進行深入提純。使用有機溶劑和無機鹽對蛋白質溶液進行分級沉淀存在較大的局限性。首先，使用分級沉淀法提取目標蛋白后，廢棄液中常常含有高濃度的有機溶劑或無機鹽，這些有毒/有害物質的回收非常困難，而一旦排放又會對環保造成巨大壓力；其次，有機溶劑和無機鹽分級沉淀法操作周期長，提取液經常要在低溫下靜置過夜；另外，為了促使蛋白質沉淀，有機溶劑和無機鹽的使用量通常都很大，抬高了產品的成本。因此，經濟、高效、環保的蛋白質純化技術一直是蛋白質提純領域的瓶頸環節[2]。目前SOD的提取/生產工藝中，依然沿用傳統的分級沉淀技術，這使得SOD生化產品的成本和產量一直難以達到理想水平[3，4]。

發明內容

本發明涉及一種利用丙烯酸聚合物作為雜蛋白沉淀劑提取超氧化物岐化酶的新方法。提取的產品純度較高，穩定性好。該方法簡單環保，成本低，周期短，有利于大規模提純SOD產品。

本發明還涉及用于提取超氧化物岐化酶的試劑盒。

本發明的內容包括：

1、一種提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，包含去除雜蛋白的步驟，其中使用丙烯酸聚合物作為雜蛋白沉淀劑。

2、根據以上1所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述丙烯酸聚合物是聚丙烯酸或者聚丙烯酸鹽。

3、根據以上1或2所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述丙烯酸聚合物的使用終濃度范圍為0.1％-2.5％(重量/體積(Wt/V))。

4、根據以上1-3中任一項所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述丙烯酸聚合物的分子量范圍為3000-10000道爾頓。

5、根據以上1-4中任一項所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述去除雜蛋白的步驟在溫度55-65℃下進行。

6、根據以上1-5中任一項所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，在所述去除雜蛋白的步驟中還使用酶保護劑。

7、根據以上6所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述酶保護劑是海藻糖。

8、根據以上6或7所述的提取超氧化物岐化酶的方法，其特征在于，所述酶保護劑的使用終濃度為1％-10％(Wt/V)。