[發明專利]用于移植治療骨缺損的復合物及其制造方法

無效

• 申請號: 200910091306.1
• 申請日: 2009-08-18
• 公開（公告）號: CN101628129A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 李榮旗;郭麗麗;王月;張紅霞;劉艷軍;肖靜;曹克富;王瑞蘭;范育紅;吳亦芳;張向利
• 申請（專利權）人: 李榮旗
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/56;A61L27/36;A61L27/12
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司
• 代理人: 盧 新

1.一種用于移植治療骨缺損的復合物，其特征在于：該復合物包括：人羊膜間充質細胞(1)和醫用骨材料(2)，在每立方毫米的醫用骨材料中均勻地接種有1*105-106個人羊膜間充質細胞(1)。

2.如權利要求1所述的用于移植治療骨缺損的復合物，其特征在于：所述醫用骨材料(2)是具有若干個孔的骨醫用載體材料，它的孔徑為200-400μm。

3.如權利要求2所述的用于移植治療骨缺損的復合物，其特征在于：所述醫用骨材料(2)為羥基磷灰石或去細胞小牛骨。

4.一種如權利要求1所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：

(a).將人羊膜間充質細胞(1)擴增到所需的數目；

(b).在室溫下，將上述人羊膜間充質細胞(1)均勻地接種到醫用骨材料(2)上，每立方毫米的醫用骨材料中接種有1*10⁵-10⁶個人羊膜間充質細胞(1)；

(c).在室溫下，將上述接種有人羊膜間充質細胞(1)的醫用骨材料(2)放置在培養液(3)內平衡4個小時以上后，即得到用于移植治療骨缺損的復合物。

5.如權利要求4所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：所述的步驟(a)是將人羊膜間充質細胞(1)放置在培養液(3)中，在溫度為36.5-37.5℃、飽和濕度、體積分數為5％的CO₂培養箱中培養。每2-3天更換全部培養液(3)，并棄去未貼壁的細胞，培養7-12天，待人羊膜間充質細胞(1)達到80％-90％融合時，將人羊膜間充質細胞(1)從培養液(3)中取出，用25g/L的胰酶消化。在消化過程中，用倒置顯微鏡觀察細胞消化情況，待65％以上的人羊膜間充質細胞(1)的胞體回縮并變圓，即終止消化。然后重復上述操作，將上述細胞分為若干份進行傳代接種培養，直至達到所需細胞數量。

6.如權利要求5所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：將步驟(b)中的接種有人羊膜間充質細胞(1)的醫用骨材料(2)放置在培養液(3)內平衡4個至8個小時后，即得到用于移植治療骨缺損的復合物。

7.如權利要求4至6任一權利要求所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：所述培養液(3)為V_DMEM∶VF₁₂為1∶1的DMEM/F12培養液，上述每升培養液中還包括：20ug的堿性成纖維生長因子和20ug的表皮生長因子。

8.如權利要求7所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：所述醫用骨材料(2)是具有若干個孔的骨醫用載體材料，它的孔徑為200-400μm，將人羊膜間充質細胞(1)的單個細胞植入上述骨醫用載體材料的孔徑內。

9.如權利要求8所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：所述醫用骨材料(2)為羥基磷灰石或去細胞小牛骨。

10.如權利要求4所述的用于移植治療骨缺損的復合物的制造方法，其特征在于：所述的室溫為15-28℃。