[發(fā)明專利]乳腺干細(xì)胞的培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法及富含乳腺干細(xì)胞的混合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910091183.1
• 申請(qǐng)日: 2009-08-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101993852A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙春華;豆曉偉;張斌;劉瑞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/06
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/06;C12N5/08
• 代理公司: 北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種基于基礎(chǔ)培養(yǎng)基的哺乳動(dòng)物包括人乳腺干細(xì)胞專用培養(yǎng)基，其中所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分為58％DMEM/F12+40％MCDB-201、2％-10％胎牛血清、1×胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-亞硒酸、1×亞油酸-牛血清白蛋白，10^-4-10^-2M抗壞血酸，1-100ng/ml?EGF、1-100ng/ml?PDGF、500ng-1mg/ml氫化強(qiáng)的松、100μg/ml青霉素和100U/ml硫酸鏈霉素，其特征在于還包含下述組分：

a)0.1-10ng/ml的雌二醇，及

b)1-100ng/ml的生長(zhǎng)激素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述雌二醇的濃度為0.3-3ng/ml，生長(zhǎng)激素的濃度為10-100ng/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述雌二醇的濃度為0.3-1.5ng/ml，生長(zhǎng)激素的濃度為10-50ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述雌二醇的濃度為1.5ng/ml，生長(zhǎng)激素的濃度為50ng/ml。

5.一種哺乳動(dòng)物包括人乳腺干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)方法包括下述步驟：

a)無(wú)菌條件下取未孕鼠乳腺脂肪墊或手術(shù)切除的未孕人乳腺脂肪墊，

b)置于含有5-10％雙抗的D-hanks液中，在D-hanks液中洗滌2次，用剪刀把組織完全剪碎，加入同體積0.2％的II型膠原酶，在37℃環(huán)境中消化大約50分鐘，15分鐘間隔搖動(dòng)一次，

c)消化完畢后加入D-hanks液，充分吹打?yàn)閱渭?xì)胞懸液，離心并吸取上清液中脂肪樣物質(zhì)，然后用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞洗滌一次，接種在組織培養(yǎng)皿中，48小時(shí)內(nèi)切勿移動(dòng)搖晃，在37℃、5％CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在2，4和6天換液各換液一次，及

d)培養(yǎng)6天后，胰酶消化并吹打細(xì)胞，過(guò)濾、離心，收集細(xì)胞，用于磁珠篩選Sca-1陽(yáng)性的乳腺干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述培養(yǎng)方法獲得的細(xì)胞混合物，其特征在于所述細(xì)胞混合物中Scal-1⁺細(xì)胞占細(xì)胞群體的比例為30-55％。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞混合物，其特征在于所述細(xì)胞混合物中Scal-1⁺細(xì)胞占細(xì)胞群體的比例為40-53％。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的細(xì)胞混合物，其特征在于所述細(xì)胞混合物中Scal-1⁺細(xì)胞占細(xì)胞群體的比例為51-53％。