[發明專利]生料固態發酵生產纖維素酶的方法

有效

• 申請號: 200910090579.4
• 申請日: 2009-08-27
• 公開（公告）號: CN101649309A
• 公開（公告）日: 2010-02-17
• 發明（設計）人: (請求不公開姓名)
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/885;C12R1/685;C12R1/845;C12R1/80
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司
• 代理人: 鐘 晶

技術領域

本發明涉及一種生產纖維素酶的方法，尤其涉及一種通過生料固態發酵來生產纖維素酶的方法。

背景技術

纖維素酶用途廣泛，纖維素酶被廣泛應用于紡織、食品、農牧等領域，有廣泛的用途。

目前，纖維素酶的固態發酵方法具有的共同特點是，原料經過高溫蒸煮殺菌，之后接種發酵制備出高活力酶劑。由于該過程需要蒸料容器，消耗大量煤、電或蒸氣，消毒過程耗時費力，不僅成本高，而且會增加擴大生產的難度。

發明內容

本發明人發現采用過碳酸鈉對生產培養基進行消毒，就能夠在原料不進行高溫滅菌的情況下，通過生料固態發酵來生產出纖維素酶。

因此，本發明的目的是提供一種原料無需高溫滅菌的由生料固態發酵纖維素酶的方法。

即，本發明提供如下的由生料固態發酵纖維素酶的方法。

[1]一種通過生料固態發酵來生產纖維素酶的方法，其特征在于，包括：制種工序；生產培養基的配制及消毒工序；接種工序；發酵工序。

[2]根據上述[1]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，在所述生產培養基的配制及消毒工序中使用過碳酸鈉。

[3]根據上述[1]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述生產培養基的配制及消毒工序為，

將0.5～4.0重量份磷酸二氫鉀、1.5～5.0重量份硫酸銨、0.01～0.05重量份硫酸鎂、1.0～5.0重量份過碳酸鈉溶解于100重量份水中配成水溶液；

另行將50～90重量份農作物秸桿粉和10～50重量份麩皮粉混合；

然后將上述水溶液和混合物進行混合。

[4]根據上述[1]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述制種工序為，

用含有0～2重量％氯化鈉的無菌水將菌種從菌種傳代培養基上洗下來，用固態發酵的方法擴大培養制成固體曲，用每升含過氧化氫酶1000單位以上的無菌過氧化氫酶溶液對固體曲進行稀釋，制成種子液。

[5]根據上述[4]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述菌種為綠色木霉、黑曲霉、米根霉或斜臥青霉。

[6]根據上述[4]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述無菌過氧化氫酶溶液是通過將過氧化氫酶溶于自來水后，用膜濾器進行除菌來制得。

[7]根據上述[4]所述的生產纖維素酶的方法，其特征在于，在接種工序中，所述種子液在生產培養基中的添加量以種子液體積(升)：生產培養基重量(公斤)計為1∶1～1∶3。

[8]根據上述[1]所說的方法，其特征在于，在發酵工序中，在裝有發酵料的容器上加蓋經過防腐劑浸泡的隔離材料。

[9]根據上述[8]所說的方法，其特征在于，所述防腐劑為苯甲酸鈉、丙酸鈉、那他霉素、山梨酸鉀中的一種或其混合物，防腐劑的總濃度為0.001重量％～10重量％。

本發明采用的生料固態發酵法有效避免使用鍋爐、大型滅菌設備，具有設備要求簡單，容易擴大，能耗和人力費用低，生產成本低等特點，實用價值顯著。

此外，本發明還提供一種生料固態發酵法生產纖維素酶用培養基，包括：50～90重量份農作物秸稈粉、10～50重量份麩皮粉、1.0～5.0重量份過碳酸鈉、1.5～5.0重量份硫酸銨、0.5～4.0重量份磷酸二氫鉀、0.01～0.05重量份硫酸鎂、100重量份水。

通過使用該培養基，能夠提供原料無需高溫滅菌的由生料固態發酵纖維素酶的方法。

本發明所說的生料固態發酵纖維素酶的方法目前未見其它文獻報道。

具體實施方式

下面對本發明進行詳細說明。

本發明的通過生料固態發酵來生產纖維素酶的方法，其特征在于，包括：制種工序；生產培養基的配制及消毒工序；接種工序；發酵工序。

1.制種工序

本發明所用的菌種可以是綠色木霉等木霉、黑曲霉等曲霉、米根霉等根霉、斜臥青霉等青霉等產纖維素酶的菌種。其培養方法為：菌種從菌種傳代培養基上用含有0～2重量％氯化鈉的無菌水洗下，之后用固態發酵的方法擴大培養制成固體曲。固體曲用每升含過氧化氫酶1000單位以上的無菌過氧化氫酶液稀釋成為種子液。

這里，即使采用不含有氯化鈉的無菌水也可以同樣能夠達到本發明目的。優選采用含有1重量％氯化鈉的無菌水。

每升含過氧化氫酶1000單位以上的無菌過氧化氫酶液可以如下制作。先將過氧化氫酶(120000國際單位)溶于120升自來水(pH調7.0)，再將此過氧化氫酶液用0.22微米的平板膜過濾器除菌，由此制得無菌過氧化氫酶溶液。