[發明專利]構樹葉總黃酮提取物及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 200910090547.4
• 申請日: 2009-08-19
• 公開（公告）號: CN101637503A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發明（設計）人: 熊偉;竇德強
• 申請（專利權）人: 大連中植環境生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/60
• 分類號: A61K36/60;A61P31/04;A61P29/00;A61K127/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢

技術領域

本發明涉及一種構樹葉提取物及其制備方法與應用，特別是涉及一種構樹葉總黃酮提取物及其制備方法與應用。

背景技術

構樹(Broussonetia?papyrifera(L.)Ven.t)為桑科構樹屬植物，在我國大部分地區有分布，日本、越南、印度等國亦有分布，資源十分豐富。構樹的成熟果實，稱為“楮實子”，收載于歷版《中國藥典》，為常見中藥，具有補腎清肝、明目利尿的功效。構樹葉又稱為楮葉，性涼味甘，無毒，能清熱利濕，涼血止血，殺蟲解毒，可用于治療吐血、衄血、血崩、外傷出血、水腫、疝氣、痢疾和癬瘡等。

從20世紀80年代開始，人們即開始對構樹的化學和藥理進行研究。如高允生等(高允生，邱玉芳，高聆，等.構葉醇提取物與黃酮苷對離體心房的抑制作用[J].中國藥理學通報，1988，4(2)：122-123)。另外Lee等從構樹的整株植物中分離得到了多個黃酮類化合物(Lee?D，Bhat?K，Fong?H?et?al.Aromatase?inhibitors?fromBroussonetia?papyrifera[J]..J.Nat.Prod，2001，64(10)：1286-1293)對構樹葉的乙醇提取物(BPAE)與總黃酮苷(BPF)對家兔和豚鼠離體心房的作用進行了研究，發現BPAE和BPF均有抑制家兔和豚鼠心房收縮的作用，且BPF的效價強度遠大于BPAE，證明了BPF是構樹抑制心房收縮的主要有效成分，同時也說明了構樹葉具有類似鈣拮抗劑的作用。但目前尚沒有關于具有抑菌和抗炎作用的構樹葉總黃酮的相關研究報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種構樹葉總黃酮提取物及其制備方法與應用。

本發明提供的制備構樹葉總黃酮提取物的方法，包括如下步驟：

1)將構樹葉粉碎成粉末；

2)將所述步驟1)得到的構樹葉粉末用乙醇的水溶液進行提取，過濾提取液后合并濾液，濃縮，得到濃縮液，再對所述濃縮液用脫脂溶劑進行脫脂，得到脫脂濃縮液；

3)將所述步驟2)得到的脫脂濃縮液進行分離純化，干燥后，得到所述構樹葉總黃酮提取物。

該方法的步驟1)中，所述構樹葉包含葉柄；所述粉末的目數為2-60目；

所述步驟2)中，乙醇的水溶液的體積百分比濃度為0-100％，優選40-75％?；

所述提取方法為回流提取法、索氏提取法、超聲提取法或閃式提取法，優選回流提取法；回流提取時，提取溫度為乙醇的回流溫度，優選50-100℃，提取次數為1-3次，每次提取所用時間為0.5-3小時；所述乙醇的水溶液的用量為所述步驟1)得到的構樹葉粗粉質量的6-20倍；所述脫脂溶劑為石油醚或氯仿。

所述步驟2)中，乙醇的水溶液的體積百分比濃度為0-100％，優選40-75％；所述提取方法為回流提取法、索氏提取法、超聲提取法或閃式提取法，優選回流提取法；所述乙醇的水溶液的用量為所述步驟1)得到的構樹葉粉末質量的6-20倍；

所述步驟3)中，所述分離純化的方法為溶劑萃取法、聚酰胺柱層析法或樹脂吸附法；

其中，溶劑萃取法包括如下步驟：將所述步驟2)得到的脫脂濃縮液用水飽和的正丁醇或乙酸乙酯進行萃取，萃取完畢后合并正丁醇或乙酸乙酯層萃取液；所述水飽和的正丁醇或乙酸乙酯的用量為所述步驟2)得到的脫脂濃縮液體積的1/2-2倍；萃取次數為1-6次；

所述聚酰胺柱層析法包括如下步驟：將所述步驟2)得到的脫脂濃縮液用聚酰胺色譜柱進行分離，淋洗液依次為水和20-80％的乙醇水溶液，收集20-80％乙醇水溶液的洗脫液；所述聚酰胺色譜柱中，聚酰胺的用量為所述構樹葉原料質量的0.5-2倍；

在分離純化之前，可按照如下方法對聚酰胺色譜柱進行預處理：將聚酰胺在95％乙醇中浸泡12小時后，回流2小時。過濾，用水清洗多次。裝入柱中，繼續用水洗滌至乙醇含量小于1％，即可使用。

所述樹脂吸附法包括如下步驟：將所述步驟2)得到的脫脂濃縮液用吸附樹脂柱進行分離，淋洗液依次為水、20-80％的乙醇水溶液和95％的乙醇水溶液，收集20-80％乙醇水溶液的洗脫液。

在分離純化之前，可按照如下方法對樹脂吸附柱進行預處理：將樹脂先用95％乙醇(樹脂∶乙醇的體積比為1∶2)浸泡12小時，回流2小時，然后裝入樹脂柱。加入高于樹脂層10厘米的95％乙醇浸泡2小時，放出浸液，至洗滌液在試管中加水稀釋(1毫升洗滌液加4毫升水)不混濁并且洗脫液紫外光譜掃描不得檢出吸收峰為止。再用水洗滌至乙醇含量小于1％，即可使用。