[發(fā)明專利]蘿卜的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910090477.2
• 申請(qǐng)日: 2009-08-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101629212A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王紹輝;李繼淑;楊瑞;曹慶芹;程繼鴻
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān) 暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蘿卜的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物。

背景技術(shù)

蘿卜(Raphanus?sativus?L.)為十字花科、蘿卜屬。一、二年生草本。 原產(chǎn)我國(guó)，各地均有栽培，品種極多，常見(jiàn)有紅蘿卜、青蘿卜、白蘿卜、水蘿 卜和心里美等。根供食用，為我國(guó)主要蔬菜之一，種子含油42％，可用于制肥 皂或作潤(rùn)滑油。種子、鮮根、葉均可入藥，功能下氣消積。生蘿卜含淀粉酶， 能助消化。利用DNA標(biāo)記輔助選擇育種將給傳統(tǒng)的雜交育種帶來(lái)革命性的變化。傳 統(tǒng)的育種選擇是對(duì)表型性狀的變異進(jìn)行選擇，但有些重要性狀無(wú)法在早期檢測(cè)出 來(lái)，分子標(biāo)記技術(shù)就可以利用種子以及幼苗進(jìn)行DNA多態(tài)性檢測(cè)，根據(jù)與目的基因 相關(guān)的標(biāo)記進(jìn)行選擇，能提高選擇的準(zhǔn)確度，縮短育種周期，提高育種效率和選擇 的可靠性，相當(dāng)簡(jiǎn)便。

葉綠體微衛(wèi)星(chloroplast?simple?sequence?repeat，cpSSR)是近年來(lái)發(fā)展 起來(lái)的一種新型高效的分子標(biāo)記技術(shù)，由于具有微衛(wèi)星標(biāo)記共顯性、高多態(tài)性、分 布廣泛性等優(yōu)點(diǎn)又兼顧到葉綠體基因組結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、相對(duì)保守、單親遺傳等特點(diǎn)，目 前廣泛用于植物群體遺傳分析及系統(tǒng)發(fā)育分析研究，在更高分類水平和自然植物群 體間基因漂移研究上特別有用。為了有效利用蘿卜的豐富資源，需要建立蘿卜的 SSR分子標(biāo)記技術(shù)體系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供蘿卜的一種DNA指紋圖譜及其獲取方法與專用引物。

本發(fā)明保護(hù)一種獲取蘿卜DNA指紋圖譜的專用引物，包括引物對(duì)NTCP9；所述 NTCP9是序列表的序列1和序列表的序列2組成的引物對(duì)。

所述專用引物還可包括下述引物對(duì)中的至少一對(duì)：

1)引物對(duì)ARCP7；所述ARCP7是序列表的序列7和序列表的序列8組成的引物 對(duì)；

2)引物對(duì)CCMP2；所述CCMP2是序列表的序列3和序列表的序列4組成的引物 對(duì)；

3)引物對(duì)ARCP4；所述ARCP4是序列表的序列5和序列表的序列6組成的引物 對(duì)；

4)引物對(duì)ARCP11；所述ARCP11是序列表的序列9和序列表的序列10組成的 引物對(duì)。

所述專用引物具體可由所述引物對(duì)NTCP9、所述引物對(duì)ARCP7、所述引物對(duì) CCMP2、所述引物對(duì)ARCP4和所述引物對(duì)ARCP11組成。

本發(fā)明還保護(hù)一種獲取蘿卜DNA指紋圖譜的方法，包括以下步驟：

(1)以蘿卜的基因組DNA為模板，用所述專用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(2)將步驟(1)中得到的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離DNA 標(biāo)記，用銀染法顯示蘿卜的DNA指紋圖譜。

利用所述的方法得到的蘿卜DNA指紋圖譜也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

本發(fā)明還保護(hù)所述專用引物在獲取蘿卜DNA指紋圖譜中的應(yīng)用。

本發(fā)明獲得的蘿卜DNA指紋圖譜多態(tài)性高、指紋豐富，將在蘿卜種子純度鑒定、 蘿卜基因作圖和分子標(biāo)記輔助育種等領(lǐng)域中發(fā)揮重要作用。

附圖說(shuō)明

圖1為應(yīng)用引物對(duì)NTCP9獲得的蘿卜的DNA指紋圖譜；圖1B中，泳道自左至 右對(duì)應(yīng)的樣本編號(hào)依次為：88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、 101、102、103、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、A1、 A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9、A10、A11、A12、A13、A14、空泳道、空泳道、 A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21、A22、A23、A24、A25。

圖2為應(yīng)用引物對(duì)ARCP4獲得的蘿卜的DNA指紋圖譜。

圖3為應(yīng)用引物對(duì)ARCP11獲得的蘿卜的DNA指紋圖譜。

圖4為不同蘿卜品種的聚類樹(shù)狀圖。

具體實(shí)施方式

以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí) 驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊 說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中所用到的蘿卜樣本均購(gòu) 自于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所國(guó)家蔬菜種質(zhì)資源中期庫(kù)。

實(shí)施例1、用cpSSR分子標(biāo)記技術(shù)獲取蘿卜的DNA指紋圖譜