[發(fā)明專利]輔助鑒定大豆籽粒含油量位點的一對專用引物及其方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910090319.7
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101613754A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱保葛;田苗苗;任海紅;陳修文;張利明;徐民新;趙麗
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān) 暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于輔助鑒定大豆籽粒含油量位點的一對專用引物及其方法。

背景技術(shù)

基于表型選擇的常規(guī)育種方法存在選擇效率低和育種周期長等缺點，迫切需要 注入現(xiàn)代分子技術(shù)手段，輔之于高效率地基因型定向選擇，才能快速高效地培育出 優(yōu)異大豆新品種。隨著分子生物學(xué)和基因組學(xué)的迅速發(fā)展，分子標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用更 加廣泛。基于PCR的分子標(biāo)記如SSR等具有多態(tài)率高、相對穩(wěn)定、檢測方法簡便快 速及易于操作等特點而深受育種家的青睞。由于分子標(biāo)記輔助選擇不易受環(huán)境因素 影響和性狀顯隱性干擾等，可以從分子水平定向選擇目標(biāo)性狀基因(或稱膠上選 擇)，同時還有可能打破不利基因之間的連鎖而高效率地聚合多個優(yōu)良基因于一體。 通常所說的分子標(biāo)記既包括目標(biāo)基因的連鎖標(biāo)記也包括目標(biāo)基因自身功能標(biāo)記。分 子標(biāo)記輔助多基因聚合育種技術(shù)已經(jīng)成為大豆等作物育種研究的一種發(fā)展趨勢，運 用該技術(shù)能否有效地將優(yōu)質(zhì)、多抗和高產(chǎn)等基因聚合到少數(shù)骨干品種中，關(guān)鍵在于 能否獲得足夠多的與目標(biāo)性狀基因或主效QTL緊密連鎖的實用分子標(biāo)記。近年來， 基于基因組中表達(dá)序列標(biāo)簽(expressed?sequence?tagging，EST)的SSR標(biāo)記 EST-SSR已經(jīng)發(fā)展為新一代的分子標(biāo)記，得到了廣泛的研究和應(yīng)用，因它是新型的 功能標(biāo)記而且能更有效地用于農(nóng)作物重要性狀基因的輔助選擇育種而倍受重視。

大豆種子油脂含量屬于數(shù)量遺傳性狀，受不等效的多基因控制，存在主效位點， 其中有些位點受加性效應(yīng)控制，并存在一定的顯性效應(yīng)和上位效應(yīng)。該性狀的遺傳 力中等偏上，高于單株籽粒產(chǎn)量而低于開花期和成熟期等性狀，可從F₂、F₃代開始 進(jìn)行選擇。國內(nèi)外許多研究者對大豆種子油脂含量和脂肪酸含量的QTL進(jìn)行了分子 標(biāo)記和定位研究，取得了不少進(jìn)展。Mansur等發(fā)現(xiàn)1個與大豆種子油脂含量有關(guān)的 標(biāo)記T153-1位于A2連鎖群；Brummer等研究發(fā)現(xiàn)位于B1連鎖群的1個油脂含量主效位 點(可解釋31％變異)及其1個相關(guān)標(biāo)記A109、位于A1連鎖群的1個油脂位點及其相 關(guān)標(biāo)記A104以及位于G連鎖群的1個油脂位點(可解釋18％以上的變異)及其相關(guān)標(biāo) 記A584。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)與中科院遺傳發(fā)育所合作研究發(fā)現(xiàn)了4個QTL位點與油脂含量 緊密相關(guān)，解釋的表型效應(yīng)最高達(dá)到13.9％，并把這些位點定位于N4-B2和N20-M連鎖 群。何冉等利用科新3號為父本、中黃20為母本建立重組自交系群體(含有192個株 系)，在0連鎖群的Satt153-Satt243區(qū)間定位了1個脂肪含量QTL，加性效應(yīng)為-0.39， 表明其減效效應(yīng)來自于中黃20。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于輔助鑒定大豆籽粒含油量位點的一對專用引物及其 方法。

本發(fā)明提供了一種輔助篩選具有高籽粒含油量性狀的大豆的方法，包括如下步 驟：

以待測大豆的基因組DNA為模板，用GNE165引物對進(jìn)行PCR擴增，檢測擴增 產(chǎn)物，擴增產(chǎn)物中含有一個275-285bp之間的DNA片段的待測大豆為候選的具有高 籽粒含油量性狀的大豆；所述GNE165引物對由序列表的序列1和序列表的序列2 所示核苷酸組成；所述高籽粒含油量性狀為籽粒的含油量≥21.5％(質(zhì)量百分含量) 的性狀。

本發(fā)明還提供了一種輔助鑒定大豆高籽粒含油量性狀的方法，包括如下步驟：

以待測大豆的基因組DNA為模板，用GNE165引物對進(jìn)行PCR擴增，檢測擴增 產(chǎn)物，擴增產(chǎn)物中含有一個275-285bp之間的DNA片段的待測大豆具有高籽粒含油 量性狀；所述GNE165引物對由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸組成； 所述高籽粒含油量性狀為籽粒的含油量≥21.5％(質(zhì)量百分含量)的性狀。

本發(fā)明還保護(hù)一對輔助鑒定大豆籽粒含油量性狀的專用引物，是GNE165引物 對；所述GNE165引物對由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸組成。從 實際應(yīng)用角度出發(fā)，上述專用引物主要用于輔助鑒定大豆高籽粒含油量性狀；所述 高籽粒含油量性狀為籽粒的含油量≥21.5％(質(zhì)量百分含量)的性狀。

所述專用引物在制備輔助鑒定大豆籽粒含油量性狀的試劑盒中應(yīng)用也屬于本 發(fā)明的保護(hù)范圍。從實際應(yīng)用角度出發(fā)，上述專用引物主要用于制備輔助鑒定大豆 高籽粒含油量性狀的試劑盒；所述高籽粒含油量性狀為籽粒的含油量≥21.5％(質(zhì) 量百分含量)的性狀。