[發明專利]輔助鑒定大豆百粒重相關位點的一對專用引物及其方法

有效

• 申請號: 200910090318.2
• 申請日: 2009-08-07
• 公開（公告）號: CN101613753A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 朱保葛;田苗苗;任海紅;陳修文;徐民新;張利明;周國安
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一對可以快速鑒定選擇大豆百粒重相關位點的專用引物及其方法。

背景技術

基于表型選擇的常規育種方法存在選擇效率低和育種周期長等缺點，迫切需要 注入現代分子技術手段，輔之于高效率地基因型定向選擇，才能快速高效地培育出 優異大豆新品種。隨著分子生物學和基因組學的迅速發展，分子標記技術的應用更 加廣泛。基于PCR的分子標記如微衛星或SSR(simple?sequence?repeat)等具有 多態率高、相對穩定、檢測方法簡便快速及易于操作等特點而被廣泛的應用。由于 分子標記輔助選擇不易受環境因素影響和性狀顯隱性干擾等，可以從分子水平定向 選擇目標性狀基因(或稱膠上選擇)，同時還有可能打破不利基因之間的連鎖而高 效率地聚合多個優良基因于一體。通常所說的分子標記既包括目標基因的連鎖標記 也包括目標基因自身功能標記。分子標記輔助多基因聚合育種技術已經成為大豆等 作物育種研究的一種發展趨勢，運用該技術能否有效地將優質、多抗和高產等基因 聚合到少數骨干品種中，關鍵在于能否獲得足夠多的與目標性狀基因或主效QTL緊 密連鎖的實用分子標記。

大豆籽粒產量＝單位面積株數×單株粒數×粒重。因此，莢粒數、粒大小(粒 長、粒寬)、單株莢數/粒數及單株粒重等均與籽粒產量密切相關。大豆產量構成 因素都是由許多微效基因或QTL控制的復雜數量性狀，遺傳力大都較低。但大豆百 粒重(是指100粒大豆種子的重量，其數值的高低直接反映籽粒體積的大小)在產 量構成因素中是一個確定的重要數量性狀，品種之間差異明顯，遺傳力比較高(55％ 左右)，以加性遺傳效應為主，在產量性狀中其遺傳規律相對簡單，主要受少數主 基因與若干微效基因共同控制。大粒是提高大豆產量的重要目標性狀之一，但迄 今很少發現該性狀基因的分子標記和圖譜定位的相關報道。

吳曉雷等定位了與大豆產量相關的4個QTLs，分布于A1、C2和M等連鎖群上， 發現了6個與百粒重相關的QTLs分布于A2、C2、D1、D2a及G連鎖群上，其中位 于連鎖群D2a上的QTL貢獻率最高，可解釋總變異的16％。Zhang等也定位了大豆 產量相關的QTLs，集中分布于B1、C2和M連鎖群上，而與百粒重相關的QTLs分布 在A2、B1、D2連鎖群上。Wang等報道了C2、E、K和M連鎖群上與產量相關的QTLs。 美國學者分別在10個群體中定位了53個大豆百粒重QTLs，涉及的連鎖群包括A1、 A2、C1、C2、D1a、E、F、G、J、K、L和M，貢獻率在0.9-22％之間，而單株重量、 單株粒重多集中分布于B1、C1、D1a、M等連鎖群，莢粒重量在C1、D1a上也有分 布。同時發現產量及其相關性狀的QTL多集中于B1、C1、C2、D1a、H1、M等連鎖 群的特定區域。

在大豆莢粒數性狀方面，朱保葛等通過誘變方法篩選到個發生單位點突變的多 粒莢(即4粒莢)突變系，使得復雜的數量遺傳性狀轉變為簡單的質量遺傳性狀， 便于分子標記與定位分析，并利用所創造的近等基因系NIL(near?isogenic?line) 材料研究表明，該位點能使大豆植株的4粒莢比率至少提高15％，并發現與突變位點 相連鎖的4個SSR標記(位于其兩側)，兩側標記Sat_107和Satt491(3.2cM和4.2cM) 已經成功地用于高產材料的輔助選擇。

發明內容

本發明的目的是提供用于輔助鑒定大豆百粒重相關位點的一對專用引物及其 方法。

本發明提供了一種輔助篩選具有高百粒重性狀的大豆的方法，包括如下步驟：

以待測大豆的基因組DNA為模板，用Satt126引物對進行PCR擴增，檢測擴增 產物，擴增產物中含有一個165-175bp之間的DNA片段的待測大豆為候選的具有高 百粒重的性狀的大豆；所述Satt126引物對由序列表的序列1和序列表的序列2所 示核苷酸組成；所述高百粒重性狀為籽粒百粒重≥25.0克的性狀。

本發明還提供了一種輔助鑒定大豆高百粒重性狀的方法，包括如下步驟：

以待測大豆的基因組DNA為模板，用Satt126引物對進行PCR擴增，檢測擴增 產物，擴增產物中含有一個165-175bp之間的DNA片段的待測大豆具有高百粒重性 狀；所述Satt126引物對由序列表的序列1和序列表的序列2所示核苷酸組成；所 述高百粒重性狀為籽粒百粒重≥25.0克的性狀。