[發明專利]誘導人胚胎干細胞或人誘導形成的多潛能干細胞向肝細胞分化的方法

有效

• 申請號: 200910089765.6
• 申請日: 2009-07-23
• 公開（公告）號: CN101962630A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 鄧宏魁;丁明孝;宋治華
• 申請（專利權）人: 北京大學;北京華源博創科技有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.用于誘導人胚胎干細胞或人誘導形成的多潛能干細胞向肝細胞分化的培養基，它由分化培養基I-1、分化培養基I-2、分化培養基I-3、分化培養基II、分化培養基III、分化培養基IV和分化培養基V組成；

所述分化培養基I-1是在基礎細胞培養基中添加人活化素A得到的培養基，分化培養基I-1中，人活化素A的終濃度為10-500ng/ml；

所述分化培養基I-2是在基礎細胞培養基中添加人活化素A和胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液得到的培養基，分化培養基I-2中，人活化素A的終濃度為10-500ng/ml，胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液的終濃度為0.01％-0.5％(體積百分含量)；

所述分化培養基I-3是在基礎細胞培養基中添加人活化素A和胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液得到的培養基，分化培養基I-3中，人活化素A的終濃度為10-500ng/ml，胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液的終濃度為0.5％-20％(體積百分含量)；

所述分化培養基II是在肝細胞培養基中添加人成纖維細胞生長因子和人骨形態形成蛋白得到的培養基，分化培養基II中，人成纖維細胞生長因子的終濃度為5-100ng/ml，人骨形態形成蛋白的終濃度為5-100ng/ml；

所述分化培養基III是在肝細胞培養基中添加人肝細胞生長因子和人角化細胞生長因子得到的培養基；分化培養基III中，人肝細胞生長因子的終濃度為5-100ng/ml；人角化細胞生長因子的終濃度為5-100ng/ml；

分化培養基IV是在肝細胞培養基中添加制瘤素M和地塞米松得到的培養基；其中，制瘤素M的終濃度為1-100ng/ml；地塞米松的終濃度為0.05-1μM；

分化培養基V是在基礎細胞培養基中添加N2，B27，谷氨酰胺，非必需氨基酸，β-巰基乙醇，制瘤素M和地塞米松得到的培養基；分化培養基V中，N2的終濃度為0.1％-10％(體積百分含量)；B27的終濃度為0.1％-20％(體積百分含量)；谷氨酰胺的終濃度為0.5-2mM；非必需氨基酸的終濃度為0.1％-10％(體積百分含量)；β-巰基乙醇的終濃度為0.05-0.2mM；制瘤素M的終濃度為1-100ng/ml；地塞米松的終濃度為0.05-1μM。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于：所述分化培養基I-1、分化培養基I-2和分化培養基I-3中，所述人活化素A的終濃度均為10、30、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500ng/ml；所述分化培養基I-2中，胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液的終濃度為0.01％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％；所述分化培養基I-3中，胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液的終濃度為0.5％、1％、5％、10％、15％、20％；

所述分化培養基II中，所述人成纖維細胞生長因子的終濃度為5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；所述人骨形態形成蛋白的終濃度為5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；

所述分化培養基III中，人肝細胞生長因子的終濃度為5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；所述人角化細胞生長因子的終濃度為5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；

所述分化培養基IV中，制瘤素M的終濃度為1、5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；地塞米松的終濃度為0.05、0.08、0.1、0.15、0.3、0.5、0.6、0.8或1.0μM；

所述分化培養基V中，N2的終濃度為0.1％、0.5％、0.8％、1.0％、2.0％、3％、5％、8％或10％；B27的終濃度為0.1％、0.5％、0.8％、1.0％、2.0％、3％、5％、8％、10％、15％或20％；谷氨酰胺的終濃度為0.5mM、0.8mM、1mM、1.5mM或2mM；非必需氨基酸的終濃度為0.1％、0.5％、0.8％、1.0％、2.0％、3％、5％、8％或10％；β-巰基乙醇的終濃度為0.05、0.08、0.1、0.12、0.15、0.18或0.2mM；制瘤素M的終濃度為1、5、10、15、20、30、35、40、50、70、80或100ng/ml；地塞米松的終濃度為0.05、0.08、0.1、0.15、0.3、0.5、0.6、0.8或1.0μM。