[發明專利]肝臟內胚層細胞及其制備和純化方法

無效

• 申請號: 200910089693.5
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN101962628A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 鄧宏魁;丁明孝;趙東昕;陳松
• 申請（專利權）人: 北京大學;北京華源博創科技有限公司
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.肝臟內胚層細胞，是由人胚胎干細胞或人誘導的多潛能干細胞分化獲得的至少表達甲胎蛋白、肝細胞核因子4A和神經性鈣黏附蛋白這三種標志性蛋白的肝臟內胚層細胞。

2.根據權利要求1所述的肝臟內胚層細胞，其特征在于：所述肝臟內胚層細胞表達甲胎蛋白、白蛋白、肝細胞核因子4A、肝細胞核因子3B和神經性鈣黏附蛋白。

3.根據權利要求1或2所述的肝臟內胚層細胞，其特征在于：所述人胚胎干細胞為人胚胎干細胞系。

4.根據權利要求3所述的肝臟內胚層細胞，其特征在于：所述人胚胎干細胞系為下述任一種細胞系：BG01，BG02，BG03，BG04，SA01，SA02，SA03，ES01，ES02，ES03，ES04，ES05，ES06，TE03，TE32，TE33，TE04，TE06，TE62，TE07，TE72，UC01，UC06，WA01，WA07，WA09，WA13和WA14；所述編號為NIH的編號。

5.權利要求1至4中任一所述肝臟內胚層細胞的制備方法，包括如下步驟

1)將人胚胎干細胞或誘導的多潛能干細胞在內胚層誘導培養基I上培養；

2)步驟1)獲得的細胞在內胚層誘導培養基II上培養；

3)步驟2)獲得的細胞在內胚層誘導培養基III上培養；

4)步驟3)獲得的細胞肝臟內胚層誘導培養基上培養，得到肝臟內胚層細胞；

所述內胚層誘導培養基I為含有質量百分含量0.02％-1％的牛血清白蛋白組分V和50-200ng/ml人活化素-A的基礎細胞培養基；所述內胚層誘導培養基II為含有質量百分含量0.02％-1％的牛血清白蛋白組分V，體積百分含量0.05％-0.5％的胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液和50-200ng/ml人活化素-A的基礎細胞培養基；所述內胚層誘導培養基III為含有質量百分含量0.02％-1％的牛血清白蛋白組分V，體積百分含量0.5％-2％的胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉混合補充液和50-200ng/ml人活化素-A的基礎細胞培養基；所述肝臟內胚層誘導培養基為含有20-60ng/ml人成纖維細胞生長因子-4和10-30ng/ml人骨成型蛋白-2的肝細胞培養基。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述方法還包括用流式細胞儀分選表達神經性鈣黏附蛋白表面蛋白的細胞。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述基礎細胞培養基為MEM、DMEM、BME、DMEM/F12、RPMI1640或Fischers。

8.根據權利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，人胚胎干細胞或誘導的多潛能干細胞在內胚層誘導培養基I上培養24h；所述方法中，步驟1)獲得的細胞在內胚層誘導培養基II上培養24h；所述方法中，步驟2)獲得的細胞在內胚層誘導培養基III上培養24h；所述方法中，步驟3)獲得的細胞肝臟內胚層誘導培養基上培養5天。

9.根據權利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于：所述人胚胎干細胞為可從商業途徑獲得的人胚胎干細胞系；

所述可從商業途徑獲得的人胚胎干細胞系優選為下述任一種細胞系：BG01，BG02，BG03，BG04，SA01，SA02，SA03，ES01，ES02，ES03，ES04，ES05，ES06，TE03，TE32，TE33，TE04，TE06，TE62，TE07，TE72，UC01，UC06，WA01，WA07，WA09，WA13和WA14；所述編號為NIH的編號。