[發明專利]表達豬干擾素(α、β或γ)的重組新城疫弱毒疫苗株

無效

• 申請號: 200910088455.2
• 申請日: 2009-07-01
• 公開（公告）號: CN101880652A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發明（設計）人: 步志高;葛金英
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12P21/02;C12N15/85;C07K14/555;C12R1/93
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 王旭

1.一種表達編碼豬干擾素的基因的重組新城疫弱毒疫苗株。

2.根據權利要求1的重組新城疫弱毒疫苗株，其為重組新城疫LaSota弱毒疫苗株。

3.根據權利要求1或2的重組新城疫弱毒疫苗株，其中所述豬干擾素是豬α、β和γ-干擾素，優選所述豬α、β和γ-干擾素的氨基酸序列分別如SEQ?ID?No.1、SEQ?ID?No.2和SEQ?ID?No.3所示，更優選編碼所述豬α、β和γ-干擾素的基因如SEQ?ID?No.4、SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示。

4.根據權利要求1或2的重組新城疫弱毒疫苗株，其為rL-Swine?α、rL-Swine?β、或rL-Swineγ。

5.根據權利要求1-4中任何一項的重組新城疫弱毒疫苗株在制備豬干擾素中的應用。

6.一種生產權利要求1-4中任何一項的重組新城疫弱毒疫苗株的方法，該方法包括：

(1)構建轉錄質粒，該轉錄質粒包括其中插入編碼豬干擾素的基因的所述新城疫弱毒疫苗株的基因組cDNA序列；

(2)構建一個或多個轉錄輔助質粒，該轉錄輔助質粒包括編碼所述新城疫弱毒疫苗株的核蛋白(NP)的cDNA序列、編碼所述新城疫弱毒疫苗株的磷酸蛋白(P)的cDNA序列、和編碼所述新城疫弱毒疫苗株的大聚合酶蛋白(L)的cDNA序列；

(3)將所述轉錄質粒和轉錄輔助質粒共轉染所述新城疫弱毒疫苗株復制許可的宿主細胞，培養轉染后的宿主細胞；

(4)收獲上清液，過濾后繼續敏感細胞傳代或接種雞胚尿囊腔救獲重組病毒株。

7.根據權利要求6的方法，其中所述重組新城疫弱毒疫苗株是重組新城疫LaSota弱毒疫苗株。

8.根據權利要求6或7的方法，其中所述轉錄質粒是pBRN-FL-SwIFNα、pBRN-FL-SwIFNβ、或pBRN-FL-SwIFNγ。

9.根據權利要求6或7的方法，其中所述轉錄輔助質粒是質粒pBSNP、pBSP或pBSL。

10.根據權利要求6-9中任何一項的方法，其中所述宿主細胞是BHK-21。

11.根據權利要求6-10中任何一項的方法制備的重組新城疫弱毒疫苗株，優選為rL-Swine?α、rL-Swine?β、或rL-Swine?γ。

12.一種生產豬干擾素的方法，該方法包括：

1)將根據權利要求1-4中任何一項的重組新城疫弱毒疫苗株接種敏感細胞或接種雞胚尿囊腔；

2)收獲細胞上清液或雞胚尿囊液。

13.重組新城疫LaSota弱毒疫苗株rL-Swine?α的SPF雞胚尿囊液，其保藏號為CGMCC?No.2615。

14.重組新城疫LaSota弱毒疫苗株rL-Swine?β的SPF雞胚尿囊液，其保藏號為CGMCC?No.2628。

15.重組新城疫LaSota弱毒疫苗株rL-Swine?γ的SPF雞胚尿囊液，其保藏號為CGMCC?No.2616。