[發明專利]文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術

無效

• 申請號: 200910088122.X
• 申請日: 2009-07-08
• 公開（公告）號: CN101642051A
• 公開（公告）日: 2010-02-10
• 發明（設計）人: 孫仲序;董鳳亮;馬海淵
• 申請（專利權）人: 北京金桐福綠色能源科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于包括以下步驟：

初代培養(外植體誘導、無菌體系建立)、繼代培養(增殖培養、擴繁培養)、生根培養、煉苗與移栽、 培養容器的選擇、接種器具的滅菌、接種方法、室內培養。

2、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于初代培養時，在晴天 取文冠果萌芽條的半木質化莖段，剪掉葉片，用塑料薄膜包回，用流水和洗衣粉反復沖洗干凈，將材料修 剪成3--4cm的莖斷，帶1～2個腋芽，放入燒杯中，加入洗衣粉，用紗布封口后，流水沖洗1-2h，將沖洗 后的莖斷，浸泡于濃度為4％的抑生素溶液中。培養基用MS0，其中糖30g/L，瓊脂粉4g/L，另加入一定濃 度的抑生素代替高壓滅菌。培養室中白天溫度(26±2)℃，夜間溫度(20±2)℃，一天光照時間16h，光源 采用白熾日光燈。接種后7天腋芽開始腫漲萌動，25天后，腋芽長至1-2cm長。

3、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于繼代培養(增殖培養、 擴繁培養)時，將初代培養的腋芽切下，接入繼代培養基上，原來的莖段不用，經過5-6次繼代培養，形 成5-10個叢生芽結構，28～30℃下，以20天為一個繼代周期。繼代培養基以MS+6BA(0.8mg/L)+KT(0.8mg /L)+NAA(0.01mg/L)+糖(30mg/L)+抑生素(4g/L)為宜。培養過程中，以散射光為最好，這樣芽體粗狀， 過強直射光苗易老化，過弱的光芽易徒長，芽體細弱，易玻璃化。

4、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于生根培養時，無菌芽 經過不斷繼代培養，達到一定基數時，即可進行生根培養，以獲得完整植株。具體把繼代苗中較粗壯，木 質化較好的單芽切下，一瓶接20個芽，接入生根培養基上，余下的綠芽接入繼代培養基上。生根培養基以 1/2MS+IBA(1.5mg/L)+NAA(0.5mg/L)+糖(20g/L)+抑生素(4g/L)。切生根芽時，利用1.5cm頂芽，不用 第二節芽，這樣的生根瓶苗整齊，出根率高。出根時間與溫度有很大關系，溫度28℃左右時，第6天根原基 凸露，此時可搬至煉苗棚接受自然光煉苗，15天左右，葉片舒張，莖葉略帶紅色，植株健壯，這樣可以明 顯提高瓶苗質量，提高上袋成活率。

5、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于煉苗與移栽時，將生 根的試管苗移到遮蔭度為50％的自然條件下煉苗15-20天，取出組培苗，用自來水沖洗干凈基部的培養基， 放入0.1-0.5g/L的高錳酸鉀溶液中浸泡1-3min，再用自來水沖洗一遍，蓋上濕毛巾保濕以備移栽。在試 管苗移栽至營養袋前，先用3-5g/L的高錳酸鉀溶液消毒裝有基質的營養袋，再將清洗后的試管苗直接移 栽到營養袋中。移栽后及時淋透定根水。并蓋上塑料薄膜。一周后逐漸打開塑料薄膜，同時注意溫度濕度 的控制，以此移栽成活率可達90％以上。當營養袋中的小苗長至15cm即可出圃大田造林或培植為采穗母株。

6、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于培養容器的選擇，傳 統組培中，培養容器需選擇耐高溫高壓的玻璃瓶和聚丙烯封口膜。而在開放組培中，采用培養基附加抑生 素代替高壓滅菌，因此，培養容器的選擇范圍較大。本發明中，我們選用一次性塑料口杯作為培養容器， 用PE保鮮膜封口。由于培養杯透光性和透氣性較好，植物在培養杯中，生長健壯，分化和生根明顯優于傳 統組培方式。

7、如權利要求1所述的文冠果的一種開放式組織培養快速繁殖技術，其特征在于接種器具的滅菌，傳 統組培中，接種用的剪子、鑷子、刀片等均采用高壓滅菌或酒精燈灼燒滅菌，而在開放組培中，接種器具 用75％酒精擦洗后，放在20％抑生素溶液浸泡1h，接種過程始終浸泡在抑生素溶液中，就可有效的防止由 于接種器具引發的污染。對高壓滅菌、酒精燈灼燒滅菌和抑生素浸泡滅菌的接種器具，作了大量傳統接種 對比試驗。，高濃度的抑生素具有較強的殺菌作用，對接種器具的滅菌效果顯著，濃度越高滅菌效果越好， 當濃度為20％時，污染率已降到了3.3％，用20％的抑生素對接種器具的浸泡滅菌，可以有效防止由于接 種器具引起的污染。