[發(fā)明專利]一種抑制桃褐腐病菌的緩釋微囊及復(fù)合膜的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910087176.4
• 申請(qǐng)日: 2009-06-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101574083A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田平芳;侯東耀;閻春琦;葛喜珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N43/90
• 分類號(hào): A01N43/90;A01N43/16;A01N25/28;A01N25/34;A01P3/00
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 劉 萍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于殺菌劑生產(chǎn)領(lǐng)域，涉及一種中藥提取物小檗堿(又名黃連素) 對(duì)桃褐腐病菌(Monilinia?fructicota)的緩釋微囊及復(fù)合膜的制備方法。

背景技術(shù)

從藥用植物中篩選抗真菌活性物質(zhì)是當(dāng)前殺菌劑研發(fā)的重要方向。我國(guó) 擁有豐富的藥用植物資源，借鑒中醫(yī)藥研究成果，可望從藥用植物中篩選出 抗植物病原真菌的天然活性物質(zhì)。這些活性物質(zhì)可直接作為天然殺菌劑，或 以此為先導(dǎo)化合物，通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾而開(kāi)發(fā)為高活性殺菌劑。

桃褐腐病是一種真菌病害，為害桃樹(shù)的花葉、枝梢及果實(shí)，尤以果實(shí)受 害最重，引起大量落果和爛果，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥因污染 環(huán)境以及病菌耐藥性而逐漸被禁用。目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)高效防治桃褐腐病且對(duì) 環(huán)境友好的天然農(nóng)藥。此外，傳統(tǒng)劑型因短暫藥效不能滿足現(xiàn)代農(nóng)藥的要求， 所以亟待篩選高效抑制桃褐腐病菌且對(duì)環(huán)境友好的天然活性物質(zhì)，并開(kāi)發(fā)為 新劑型以延長(zhǎng)藥效時(shí)間。

經(jīng)過(guò)大量篩選，發(fā)現(xiàn)中藥黃連提取物中的小檗堿對(duì)桃褐腐病菌具有強(qiáng)烈 抑制作用。在此基礎(chǔ)上，以殼聚糖為囊壁材料，以小檗堿為囊心，制備了小 檗堿-殼聚糖微囊，體外釋放試驗(yàn)表明其緩釋效果。此外，以小檗堿、殼聚糖 為主料制備了復(fù)合膜，該膜因具有緩釋效果而持久抑制桃褐腐病菌，并且該 膜還具有保鮮效果。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境污染和人的毒性以及短暫藥效，本發(fā)明旨在克 服這些缺陷，尋求一種可以有效抑制桃褐腐病菌的天然藥物，并將其制成緩 釋劑型。涉及長(zhǎng)效殺菌的小檗堿-殼聚糖微囊以及具有抗菌和保鮮雙重功能的 復(fù)合膜。

本發(fā)明提供了一種抑制桃褐腐病菌的微囊的制備方法，其特征在于，該 方法包括如下步驟：

1)稱取殼聚糖和小檗堿，殼聚糖和小檗堿的質(zhì)量比為9-11∶0.22-0.28， 加入醋酸溶液，待殼聚糖和小檗堿充分溶脹后，攪拌溶解，靜置，去氣泡， 得到小檗堿-殼聚糖溶液，備用；

2)將小檗堿殼聚糖溶液逐滴加入含司盤(pán)80的大豆油中，在40～50℃恒 溫下，進(jìn)行攪拌，乳化28-32min后形成W/O體系；

3)逐滴加入戊二醛溶液，攪拌2.5-3.5個(gè)小時(shí)，離心，使微囊完全沉降；

4)傾取上層制備液，所得微囊用石油醚洗滌3-5次，所得微囊在48-52℃ 下真空干燥23-25小時(shí)，即得。

本發(fā)明還提供了一種抑制桃褐腐病菌的緩釋復(fù)合膜的制備方法，其特征 在于，該方法包括如下步驟：

1)稱取殼聚糖，加入到含2％醋酸和5-10％甘油的水溶液中，同時(shí)加 入小檗堿，溫度低于40℃，攪拌，使小檗堿及殼聚糖完全溶解配置成膜液， 殼聚糖和小檗堿的質(zhì)量比為9-11∶0.22-0.28。

2)靜置，使膜液中的氣泡完全消失，將膜液傾倒于平板上，自然風(fēng)干 后揭膜。

通過(guò)大量篩選，發(fā)現(xiàn)黃連這一傳統(tǒng)中藥的提取物對(duì)桃褐腐病菌具有強(qiáng)烈 抑制效果。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，黃連提取物中的小檗堿發(fā)揮著關(guān)鍵作用，小檗 堿即能強(qiáng)烈抑制菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)。為避免傳統(tǒng)農(nóng)藥的短暫藥效，制備了 具有緩釋效果的微囊和復(fù)合膜，兩者均具緩釋效果。此外，小檗堿-殼聚糖復(fù) 合膜對(duì)桃具有保鮮功能。由于小檗堿為天然化合物，對(duì)環(huán)境和植物無(wú)毒副作 用，且已能人工合成，適合工業(yè)放大，所以具有廣闊市場(chǎng)前景。

具體實(shí)施方式

下面的具體方法可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任 何方式限制本發(fā)明。

小檗堿在0.001～100mg/mL范圍內(nèi)，隨著濃度的升高，其抑制作用逐漸 增強(qiáng)，小檗堿對(duì)桃褐腐病菌的有效中濃度EC₅₀為4.55ug/mL，即導(dǎo)致50％菌體 死亡的濃度。

小檗堿水溶液按7.5mg/mL，3.75mg/mL，1.875mg/mL，0.937mg/mL， 0.468mg/mL，0.234mg/mL，0.117mg/mL，0.058mg/mL濃度配制，各取6mL 分別加入54mL融化的培養(yǎng)基(約60℃)，攪拌混勻，116℃高壓滅菌25min測(cè)得 小檗堿的最小抑菌濃度(MIC)為46.9ug/mL，即在此濃度下菌絲完全停止生 長(zhǎng)。

抑制桃褐腐病菌的緩釋微囊的制備：

1)稱取殼聚糖和小檗堿，殼聚糖和小檗堿的質(zhì)量比為9-11∶0.22-0.28， 加入醋酸溶液，待殼聚糖和小檗堿充分溶脹后，攪拌溶解，靜置，去氣泡， 得到小檗堿-殼聚糖溶液，備用；