[發(fā)明專利]固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910087132.1
• 申請(qǐng)日: 2009-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN101923090A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉儒平;蔡新霞;劉軍濤;王蜜霞;劉春秀;羅金平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院電子學(xué)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/553;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 周國城

1.一種固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，將載體表面進(jìn)行醛基化處理后，固定腦鈉肽捕獲抗體，用卵清蛋白將未固定腦鈉肽捕獲抗體的醛基封閉，利用抗原抗體反應(yīng)，將腦鈉肽抗原分子的C-端區(qū)與腦鈉肽捕獲抗體結(jié)合，用酪蛋白將未結(jié)合腦鈉肽抗原的腦鈉肽捕獲抗體進(jìn)行封閉，在腦鈉肽抗原分子內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)端結(jié)合標(biāo)記有熒光量子點(diǎn)的腦鈉肽檢測抗體；其包括步驟：

(1)制備熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的腦鈉肽檢測抗體；

(2)將載體表面氨基化；將氨基化的載體進(jìn)行雙功能試劑的交聯(lián)，使其表面形成活化的醛基；

(3)將腦鈉肽捕獲抗體固定在載體上；

(4)采用卵清蛋白將載體上未參與反應(yīng)的醛基封閉；

(5)在載體上滴加待測腦鈉肽樣品溶液，37℃水浴10～120分鐘；

(6)采用酪蛋白將未與待測樣品中腦鈉肽抗原結(jié)合的腦鈉肽捕獲抗體進(jìn)行封閉；

(7)在載體上加入(1)步制備的熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的腦鈉肽檢測抗體，37℃水浴5～60分鐘，形成固相抗體-抗原-熒光量子點(diǎn)標(biāo)記檢測抗體的復(fù)合物；

(8)用PBST洗滌，去掉多余的未參與反應(yīng)的熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的腦鈉肽檢測抗體溶液；

(9)沖洗，晾干，制成成品。

2.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，載體表面醛基化處理，所用試劑為氨基硅烷和戊二醛；先用氨基硅烷進(jìn)行氨基化反應(yīng)，然后用戊二醛進(jìn)行醛基化反應(yīng)，在載體表面形成活化的醛基，與腦鈉肽捕獲抗體的氨基進(jìn)行縮合反應(yīng)，形成共價(jià)鍵。

3.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)，是將可以識(shí)別腦鈉肽分子C-端區(qū)的腦鈉肽捕獲抗體滴加于醛基化的載體表面，在37℃水浴中放置30～120分鐘，然后用洗液和緩沖液沖洗，晾干。

4.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)，是在固定腦鈉肽捕獲抗體的光學(xué)敏感膜上滴加1％～10％的卵清蛋白封閉液，封閉沒反應(yīng)的醛基，在37℃水浴中放置60分鐘后，用蒸餾水沖洗，晾干。

5.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)，是加入酪蛋白溶液封閉60分鐘，雙蒸水清洗，晾干。

6.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述載體，為玻璃片、金屬片、PC板材、有機(jī)高分子薄膜其中之一。

7.如權(quán)利要求1所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述腦鈉肽捕獲抗體，為單克隆抗體，該抗體可以識(shí)別腦鈉肽分子的C-端區(qū)；標(biāo)記有熒光量子點(diǎn)的腦鈉肽檢測抗體，可以識(shí)別腦鈉肽分子內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)，即腦鈉肽捕獲抗體與腦鈉肽檢測抗體能識(shí)別腦鈉肽抗原的不同表位形成雙抗體夾心復(fù)合物，通過光源激發(fā)熒光量子點(diǎn)發(fā)光來檢測腦鈉肽含量。

8.如權(quán)利要求1或7所述的固定人體腦鈉肽的光學(xué)敏感膜的制備方法，其特征在于，所述熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的腦鈉肽檢測抗體，其中使用的熒光量子點(diǎn)是CdSe、CdS、ZnS、InP、InAs及其核殼結(jié)構(gòu)中的一種或幾種。