[發(fā)明專利]構(gòu)建膀胱出口梗阻動物模型的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910086948.2
• 申請日: 2009-06-11
• 公開（公告）號: CN101575613A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李向東;林蔚;張華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān) 暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及構(gòu)建膀胱出口梗阻動物模型的方法。

背景技術(shù)

膀胱出口梗阻(BOO)是下尿道綜合癥(LUTS)的主要病因之一，在成年男性中發(fā)病率很高，且隨著年齡增長而增加。我國男性LUTS患病率不斷上升，幾乎接近歐美國家，嚴(yán)重影響著男性的生理健康和生活質(zhì)量。膀胱出口梗阻動物模型的產(chǎn)生對于病理的分子機(jī)制研究以及藥物的篩選具有重要的意義。目前主要有如下兩種方法產(chǎn)生的梗阻動物模型：①手術(shù)結(jié)扎法：對鼠、兔等小型動物尿道進(jìn)行結(jié)扎形成機(jī)械性梗阻。其梗阻程度難以確定；一旦結(jié)扎梗阻即可形成，是一種急性梗阻，而非人類的慢性進(jìn)行性梗阻；②NO合酶(iNOS)缺陷的基因敲除小鼠：這是迄今為止所報(bào)道的唯一一個(gè)BOO基因修飾的動物模型，但是其BOO的發(fā)病率只有20％。

現(xiàn)有的梗阻動物模型存在著發(fā)病率低、不能確切地模擬病因等問題，因而不能成為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用上通用的模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種構(gòu)建膀胱出口梗阻動物模型的方法。

本發(fā)明所提供的構(gòu)建膀胱出口梗阻動物模型的方法，是向動物中轉(zhuǎn)入芳香化酶編碼基因，得到含有所述芳香化酶編碼基因的動物作為膀胱出口梗阻動物模型。

其中，所述向動物中轉(zhuǎn)入芳香化酶編碼基因的方法可包括如下步驟：向離體的所述動物的受精卵中導(dǎo)入所述芳香化酶編碼基因，得到含有所述芳香化酶編碼基因的受精卵，再將其通過非外科手術(shù)方法移入另一所述動物的子宮中，產(chǎn)出含有所述芳香化酶編碼基因的動物幼仔，即為所述膀胱出口梗阻動物模型。

所述芳香化酶編碼基因具體可以是通過表達(dá)盒轉(zhuǎn)入的。所述表達(dá)盒具體可以是由啟動子序列、芳香化酶編碼基因序列和牛生長激素基因的polyA信號序列按上游至下游的次序依次連接形成的。

所述表達(dá)盒具體可是通過重組載體導(dǎo)入的。

所述芳香化酶編碼基因?yàn)槿朔枷慊妇幋a基因。

所述人芳香化酶編碼基因可為如下的a)、b)或c)所示的分子：

a)序列表中序列2自5′末端起第7-2154位核苷酸所示的DNA分子；

b)在嚴(yán)格條件下與a)限定的DNA序列雜交且編碼人芳香化酶的DNA分子；

c)與a)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且編碼人芳香化酶的DNA分子。

所述啟動子可為如下的1)、2)或3)所示的分子：

1)序列表中序列1自5′末端起第7-1217位核苷酸所示的DNA分子；

2)在嚴(yán)格條件下與1)限定的DNA序列雜交且具有相同功能的DNA分子；

3)與1)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且具有相同功能的DNA分子。

所述牛生長激素polyA信號的核苷酸序列具體可如序列表中序列3所示。

所述動物具體可為鼠，優(yōu)選為C57BL/6小鼠。

人芳香化酶編碼基因在構(gòu)建膀胱出口梗阻動物模型中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

老年男性體內(nèi)的激素水平呈現(xiàn)雌/雄激素比例上升的狀態(tài)，而膀胱出口梗阻主要發(fā)生于老年男性。該動物模型由于高表達(dá)了芳香化酶(體內(nèi)將雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素的關(guān)鍵酶)，體內(nèi)的雌激素水平高，近似地模擬了老年男性體內(nèi)的激素狀態(tài)。這種激素狀態(tài)潛移默化地誘導(dǎo)很多相關(guān)疾病，包括膀胱出口梗阻，它區(qū)別于其它幾種手術(shù)急性梗阻模型，是由于激素水平的變化而導(dǎo)致的慢性疾病，比較符合臨床上老年男性多發(fā)膀胱出口梗阻疾病的表現(xiàn)。

本發(fā)明的發(fā)明人對多種動物進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，最后發(fā)現(xiàn)用C57BL/6小鼠作為受體動物，構(gòu)建的模型比其它品種的小鼠效果要好，其它品種小鼠構(gòu)建的模型的膀胱出口梗阻的表型沒有C57BL/6明顯。

本發(fā)明模擬老年男性體內(nèi)雌/雄激素比例升高的特點(diǎn)，利用轉(zhuǎn)基因的方法使小鼠體內(nèi)高表達(dá)雌激素，實(shí)現(xiàn)自發(fā)的產(chǎn)生膀胱出口梗阻。與現(xiàn)有的結(jié)扎法所產(chǎn)生的急性梗阻相比，本發(fā)明的動物模型產(chǎn)生的梗阻類似于人類的慢性進(jìn)行性梗阻，能夠確切的模擬病因，更加符合人類實(shí)際發(fā)病情況；與NO合酶(iNOS)缺陷的基因敲除小鼠模型相比，本發(fā)明模型的發(fā)病率更高，可達(dá)90％(N＝20)。與相同條件下用FVB/N鼠構(gòu)建的模型相比，本發(fā)明構(gòu)建的模型的性狀明顯，發(fā)病率高，F(xiàn)VB/N鼠構(gòu)建的模型的發(fā)病率僅為5％。本發(fā)明模型可應(yīng)用于雌激素誘導(dǎo)膀胱逼尿肌功能異常的分子機(jī)理的研究、在體動物水平抑制雌激素信號通路對膀胱逼尿肌的功能的改變的研究等，因此，本發(fā)明的動物模型更加適合于對膀胱出口梗阻的病理分子機(jī)制的研究以及藥物的篩選，具有重要意義。

附圖說明

圖1為芳香酶表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2為PCR鑒定結(jié)果圖。