[發(fā)明專利]一株煙曲霉及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910086919.6
• 申請日: 2009-06-18
• 公開（公告）號: CN101575576A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙長琦;賈栗;朱妍妍;艾嫦
• 申請（專利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/18;C12P19/60;C12R1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān) 暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株煙曲霉及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

鬼臼毒素(podophyllotoxin)主要存在于小檗科鬼臼屬及其近緣植物中，是一類具有廣泛生物學(xué)活性的天然化合物，有擬雌激素樣、抗雌激素樣、抗癌、抗病毒、抗真菌、鎮(zhèn)靜、抑制植物生長和抗氧化等作用。特別是其具有較強的抗癌活性，其作用機制是抑制微管蛋白的解聚作用以阻止細胞分裂以及抑制DNA拓撲異構(gòu)酶的活性。鬼臼毒素的糖苷衍生物etoposide和teniposide的毒性較低，對小細胞肺癌、淋巴癌等多種腫瘤疾病均具有很好的療效而成為臨床應(yīng)用的廣譜抗腫瘤藥物。

目前，鬼臼毒素主要是從野生鬼臼類植物的根莖中提取得到，而這類植物在全世界僅有4屬15種，我國有3屬12種，主要生長在秦嶺、西藏等高海拔地區(qū)，其生長緩慢，且鬼臼毒素類物質(zhì)的含量較低。由于鬼臼毒素類物質(zhì)在醫(yī)學(xué)和農(nóng)林防治等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，因而其需求量日益增加；對野生鬼臼類植物資源的大量采集，已使其資源遭到嚴重破壞，造成生物多樣性和生態(tài)環(huán)境的不可逆的損失，因此解決鬼臼毒素類物質(zhì)的來源問題具有重要意義。

由于植物生長環(huán)境復(fù)雜，難以模擬，且其生長周期長，很難進行大規(guī)模的人工栽培，而組織培養(yǎng)技術(shù)對于鬼臼類植物也不適用；加之，鬼臼毒素類物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，化學(xué)合成雖可進行，但成本太高，而通過基因工程學(xué)手段構(gòu)建工程菌也由于參與形成該類物質(zhì)的酶數(shù)量過多而無法進行。所以利用內(nèi)生菌具有產(chǎn)生和宿主相同或相似的生物活性物質(zhì)的性質(zhì)，來解決鬼臼毒素的來源問題，可能是唯一也是最有效的方法。

近年來，已有學(xué)者利用內(nèi)生菌具有產(chǎn)生和宿主相同或相似的生物活性物質(zhì)的性質(zhì)，對我國特有的一些鬼臼類植物的內(nèi)生菌進行了研究，已有從川八角蓮、中華山荷葉中分離到青霉屬的內(nèi)生菌，其培養(yǎng)物經(jīng)層析分析具有與鬼臼毒素相同的Rf值的報道(中華山荷葉內(nèi)生真菌的分離及其發(fā)酵產(chǎn)生藥用成分的初步研究，劉仕平、曾松茸、郭仕平、楊春艷、張玲琪，中國藥物與臨床，2003.3(3)：227-228；川八角蓮內(nèi)生真菌產(chǎn)鬼臼毒素類似物的初步研究，郭仕平、蔣斌、蘇瑩珍、劉仕平、張玲琪，生物技術(shù)，2004.14(2)：55-56.)。

此外，由于鬼臼類植物中還含有多種黃酮類化合物，因而其內(nèi)生菌也可能產(chǎn)生黃酮類化合物。許多研究證實，黃酮類化合物在人體中具有多種生物活性，包括抗氧化、抗癌、防癌、清除自由基、抗病毒、消炎和促進血管舒張等。此外，異黃酮(如染料木黃酮和羥基異黃酮)還具有雌激素特性。黃酮類化合物的多種生理作用，使其在醫(yī)藥、食品等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株煙曲霉。

本發(fā)明所提供的煙曲霉是從甘肅省漳縣大草灘(海拔2700m)采集的植物桃兒七(Sinopodophyllum?hexandrum(Royle)Ying)的根及根狀莖中分離、篩選、純化得到的，根據(jù)其形態(tài)特征等證實屬于半知菌綱、叢梗孢目、叢梗孢科、曲霉屬，將其命名為煙曲霉(Aspergillus?fumigatus)TEQA。煙曲霉(Aspergillus?fumigatus)TEQA已于2009年6月11日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC№3115。

煙曲霉(Aspergillus?fumigatus)TEQA?CGMCC№3115在PDA瓊脂培養(yǎng)上生長迅速、菌落中心稍凸起、無輻射狀皺紋；菌落質(zhì)地絲絨狀到絮狀；分生孢子結(jié)構(gòu)大量，中部多、邊緣少，近于帶灰的橄欖綠或海貍灰；無滲出液；輕霉味；菌落反面黃褐色或帶綠的淡黃色。

分生孢子頭幼時球形或半球形，成熟時呈致密的圓柱狀，150-350微米或更長；分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)，少量發(fā)生于氣生菌絲，通常前者的孢梗莖較長，后者的較短，上部帶不同程度的綠色并逐漸膨大形成頂囊，壁平滑；頂囊燒瓶狀，直徑20-30微米，但少數(shù)小頂囊的直徑僅有6.5-15微米，約1/2到3/4的表面可育，呈不同程度的綠色或淺灰綠色；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)單層，瓶梗5-8×2-2.5微米，近于平行；分生孢子球形或近球形，直徑2.5-3微米或稍大，壁稍粗糙。

綜合上述特征，依據(jù)《真菌鑒定手冊》、《中國真菌志》等資料，上述分離得到的菌株具有煙曲霉的基本特征，將其鑒定為煙曲霉(Aspergillus?fumigatus)。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備鬼臼毒素和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷和/或黃芪苷的方法。