[發明專利]一種抗I型志賀毒素IgY抗體、及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 200910085981.3
• 申請日: 2009-06-10
• 公開（公告）號: CN101570574A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 王慧;侯曉軍;王琴;包士中;蔡昆;史晶;蔭俊
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/02;C07K1/14;C12P21/08;A61K39/40;A61P39/02;G01N33/53;G01N33/569
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技術領域

本發明涉及一種IgY抗體，具體說涉及一種特異抗I型志賀毒素 的IgY抗體，還涉及該抗體的制備方法及用途。

背景技術

志賀毒素(Shiga?Toxin，Stx)作為腸道病原菌產生的一類具有腸 毒性、細胞毒性和神經毒性的細菌外毒素，是急性細菌性痢疾、霍亂 O139、O157:H7等新發腸道病原菌最為關鍵的強致病毒力因子。臨 床上引起出血性結腸炎(hemorrhagic?colitis，HC)、血栓形成性血小 板減少性紫癜(TTP)以及病死率高達80～90％的溶血性尿毒癥 (hemolytic?uremic?syndrome，HUS)等嚴重并發癥，每年全球數百 萬人患此類疾病。

目前針對志賀毒素尚無特異有效的預防產品和急救治療藥物。臨 床普遍采用的抗生素治療主要針對的是產毒病原菌，已經引起多重耐 藥菌株的出現，造成抗生素治療的失效。抗生素使用造成更加不利的 后果是菌體崩解引發志賀毒素過量釋放，加大了由毒素引發各種并發 癥的風險。因此針對志賀毒素相關疾病的治療主張慎用抗生素，而應 尋求特異性拮抗藥物作為新的有效治療手段。

I型Stx(Stx1)由1個志賀毒素A亞單位(StxA)和5個志賀 毒素B亞單位(StxB)組成，毒素通過StxB介導與真核細胞表面的 Gb3受體結合，進而StxA作用于細胞28S?rRNA引起細胞病變。StxB 與細胞Gb3受體的結合是毒素發揮作用的起始關鍵環節，如能阻斷 這種結合，將從根本上抑制Stx分子毒性的發揮。研究方向主要集中 在毒素受體類似物和抗體治療方面。Kitov，PI.報道了能與Stx結合的 多糖化合物，具有潛在的治療應用價值(Kitov?PI，Sadowska?JM，Mulvey?G et?al.Shiga-like?toxin?are?neutralized?by?tailored?multivalent?carbohydrate?ligants. Nature?2000.403：669-672.)；2002年Natori?Y.報道了Gb3受體治療的實例 (Natori?Y.New?drugs?that?prevent?cytotoxicity?of?Shiga?toxins.Nippon?Rinsho.2002. 60(6)：1131-1137.)，包括一種能在胃腸道途徑阻止毒素擴散的新制劑和 另一種可在循環系統抑制志賀毒素毒性的水溶性制劑。但是受體類多 糖化合物的復雜制備工藝和副作用成為制約其發展的障礙。最近，有 學者報道可表達毒素模擬受體的益生菌具有顯著的毒素中和效果，可 用于治療志賀毒素(Paton?AW，Morona?R，Paton?JC.A?new?biological?agent?for treatment?of?Shiga?toxigenic?Escherichia?coli?infections?and?dysentery?in?humans.Nat Med.2000.6(3)：257-8.)及破傷風類疾病，但是這種活菌治療的安全性有 待進一步考察和驗證(PatonAW?et?al，2000；Focareta?A?et?al，2006)。在抗體 治療方面，Nakao，H等研究報道的單克隆抗體能夠阻斷Stx與細胞受 體的結合，中和Stx細胞毒性(Nakao?H，Kataoka?C，Kiyokawa?N?et?al. Monoclonal?antibody?to?Shiga?toxin?1，which?blocks?receptor?binding?and?neutralizes cytotoxicity.Microbiol.and?Immunol.2002.46(11)：777-780.)；2004年Inoue，KI (Inoue?KI，Itoh?K，Nakao?H?et?al.Characterization?of?a?Shiga?toxin?1-neutralizing recombinant?Fab?fragment?isolated?by?phage?display?system.Tohoku?J.Exp.Med. 2004.203：295-303.)利用噬菌體展示技術篩選獲得具有Stx毒性中和效 應的重組Fab抗體片段。但臨床應用有待于重組抗體制備工藝的改進 完善。