[發明專利]檢測豬免疫球蛋白G的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 200910085946.1
• 申請日: 2009-06-01
• 公開（公告）號: CN101571540A
• 公開（公告）日: 2009-11-04
• 發明（設計）人: 萬宇平;高東微;王雅靜;馬孝斌;劉中勇;蔡克周;余厚美;陳永紅;李明
• 申請（專利權）人: 北京望爾康泰生物技術有限公司;北京望爾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及酶聯免疫檢測技術，具體涉及一種用于檢測豬免疫球蛋白G的 酶聯免疫試劑盒，其特別適于豬血漿蛋白粉中豬免疫球蛋白G的測定。

技術背景

血漿蛋白粉作為一種新型蛋白飼料，具有營養全面、易消化吸收、適口性 好、富含免疫球蛋白等特點，在仔豬飼料中廣泛添加。按照其血液原料來源和 加工方法主要有以下幾類：豬血漿蛋白粉(spray-dried?plasma?protein，SDPP)、低 灰分豬血漿蛋白粉(LAPP)、母豬血漿蛋白粉(SDSPP)和牛血漿蛋白粉(SDBP)，作 用效果大體相同，其中以SDPP較多且最為常用，因此一般情況下血漿蛋白粉多 指SDPP。

大量研究表明，SDPP對仔豬的免疫保健作用主要是由于其富含的大量免疫 球蛋白。早期斷奶仔豬免疫系統尚未發育成熟，機體抵抗能力低，SDPP則可以 提高其抵抗能力，加強免疫保健。因此免疫球蛋白含量是判定血漿蛋白粉質量 和品質的重要指標。因此，一種能夠檢測SDPP中豬免疫球蛋白G含量的方法 顯得特別重要。

目前主要采用瓊脂雙向或單向免疫擴散法，此外還有免疫電泳法、高壓液 相色譜法等等來測定豬免疫球蛋白G含量。由于上述方法所用技術難以系統化 和標準化、儀器設備復雜和操作繁瑣等因素，不適合現場查驗和大量樣本篩查。

發明內容

本發明的目的在于針對上述不足提供一種用于豬免疫球蛋白G含量測定的 酶聯免疫試劑盒，其操作簡單適合現場大批量樣品的篩選。

本發明試劑盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶標板(包被原為抗原、抗體或抗抗體)；

(2)酶標記物(為酶標記抗原、酶標記抗體或酶標記抗抗體)；

(3)豬免疫球蛋白G特異性抗體工作液(當酶標板上包被抗原且酶標記物為 酶標記抗抗體或酶標板上包被抗抗體且酶標記物為酶標記抗原時含 有)；

(4)豬免疫球蛋白G標準品溶液；

(5)底物顯色液；

(6)終止液；

(7)濃縮洗滌液；

(8)濃縮復溶液。

本發明所提供的檢測豬免疫球蛋白G的酶聯免疫試劑盒，包括豬免疫球蛋白 G特異性抗體工作液及預包被包被原的酶標板和酶標記物工作液；所述酶標記 物為酶標記的抗抗體，酶標記豬免疫球蛋白G抗原或酶標記豬免疫球蛋白G特 異性抗體；所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體。

所述酶標記物的標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酯酶，其中優選辣根 過氧化物酶；酶標記的羊抗鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體是采用戊二醛法或過碘酸 鈉法將標記酶與抗抗體進行偶聯得到的；酶標記抗原是采用戊二醛法或過碘酸 鈉法將標記酶與豬免疫球蛋白G偶聯得到的；酶標記特異性抗體是采用戊二醛 法或過碘酸鈉法將標記酶與特異性抗體偶聯得到的，辣根過氧化物酶可采用現 有技術中的多種方法將其與抗抗體進行偶聯，如戊二醛法，過碘酸鈉法等，本 發明經過長期的勞動創造將過碘酸鈉法進行了改良，使其省時、降低辣根過氧 化物酶(HRP)與抗抗體的濃度比率，節省了原材料。

所述豬免疫球蛋白G特異性抗體可為豬免疫球蛋白G單克隆抗體或豬免疫 球蛋白G多克隆抗體；它們均是用豬免疫球蛋白G作為免疫原得到的；所述豬 免疫球蛋白G多克隆抗體可為鼠源、馬源、羊源、兔源或豚鼠源抗體，所述豬 免疫球蛋白G單克隆抗體優選為豬免疫球蛋白G鼠單克隆抗體，所述豬免疫球 蛋白G多克隆抗體優選為豬免疫球蛋白G兔多克隆抗體。

所述豬免疫球蛋白G單克隆抗體優選為豬免疫球蛋白G的單克隆雜交瘤細 胞株C-4-2CGMCC?No.3110分泌的單克隆抗體。

所述豬免疫球蛋白G單克隆雜交瘤細胞株C-4-2CGMCC?No.3110(分類命 名：對豬IgG單克隆抗體雜交瘤細胞株)已于2009年05月26日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區 大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)。

以上抗體均可以用豬免疫球蛋白G作為免疫原制備。

為了更方便現場監控和大量樣本篩查，所述試劑盒還包括豬免疫球蛋白G 標準品溶液、顯色劑、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液。

所述濃縮洗滌液優選為0.5％～1.0％吐溫20和0.1-0.3‰硫柳汞防腐劑、pH為 7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量百分比。