[發(fā)明專利]一種鑒定小麥低分子量谷蛋白亞基等位變異的質(zhì)譜方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910085251.3
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101566599A
• 公開（公告）日: 2009-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 晏月明;王愛麗;高利艷
• 申請（專利權(quán)）人: 首都師范大學(xué)
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64;G01N1/28;G01N1/36
• 代理公司: 北京諾孚爾知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 龐 濤

1、一種鑒定低分子量谷蛋白亞基等位變異的質(zhì)譜方法，是用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜對低分子量谷蛋白亞基進行鑒定，根據(jù)其蛋白特征峰，確定低分子量谷蛋白亞基的等位變異。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亞基的制備方法包括以下步驟：

(1)用體積百分含量為30-70％乙醇溶液除去小麥中的醇溶蛋白，取沉淀；

(2)在上述步驟(1)獲得的沉淀中加入異丙醇溶液，60-70℃溫浴40-60min，取沉淀；

(3)在上述步驟(2)獲得的沉淀中加入溶液A，30-50℃溫浴50-60min；

所述溶液A由異丙醇、DTT、Tris-HCl和水組成；

所述溶液A中，異丙醇的體積百分含量為50％，DTT的體積百分含量為1％，Tris-HCl的pH為8.0，Tris-HCl終濃度為80mM；

(4)在上述步驟(3)的溶液中加入溶液B，50-60℃溫浴30-40min，取上清；

所述溶液B由異丙醇、4-乙烯基吡啶、Tris-HCl和水組成；

所述溶液B中，異丙醇的體積百分含量為50％，4-VP的體積百分含量為1.4％，Tris-HCl的pH為8.0，Tris-HCl的終濃度為80mM；

(5)在上述步驟(4)獲得的上清中加入丙酮溶液，取沉淀，得到小麥低分子量谷蛋白亞基。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，所述乙醇溶液為體積百分含量為70％的乙醇水溶液。

4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，所述異丙醇溶液為體積百分含量為55％的異丙醇水溶液。

5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(5)中，所述丙酮溶液為體積百分含量為80％的丙酮水溶液。

6、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，溫浴的條件為65℃溫浴50min；所述步驟(3)中，溫浴的條件為40℃溫浴55min；所述步驟(4)中，溫浴的條件為55℃溫浴35min。

7、根據(jù)權(quán)利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亞基上樣前還進行預(yù)處理；

所述預(yù)處理是將低分子量谷蛋白亞基溶于溶液C中；

所述溶液C由乙腈、TFA和水組成；

所述溶液C中，乙腈的體積百分含量為50％，TFA的體積百分含量為0.05％。

8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亞基的上樣包括以下步驟：

將芥子酸溶液滴加到靶板的樣品孔內(nèi)，待芥子酸溶液干燥后，在樣品孔內(nèi)再滴加預(yù)處理過的低分子量谷蛋白亞基溶液，待低分子量谷蛋白亞基溶液干燥后，再在樣品孔內(nèi)滴加芥子酸溶液；

所述芥子酸溶液是將芥子酸溶解于溶液C中得到的；

所述溶液C由乙腈、TFA和水組成；

所述溶液C中，乙腈的體積百分含量為50％，TFA的體積百分含量為0.05％；

所述芥子酸溶液中，芥子酸的濃度為10mg/ml。

9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜儀的參數(shù)設(shè)置如下：

(1)加速電壓：25kV；

(2)導(dǎo)絲電壓：0.15％；

(3)電網(wǎng)電壓：94％；

(4)延遲時間：950ns；

(5)激光功率：1900-2400(step?100)；

(6)分子量范圍：10-50kDa；

(7)Low?mass?gate：10kDa；

(8)Digitizer?Binsize：4nsec；

(9)輸入帶寬：250MHz；

(10)50laser?shots/Mass?spectra，自動積累隨機模式。

10、根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述低分子量谷蛋白亞基等位變異的位點為低分子量谷蛋白亞基的Glu-3位點。