[發明專利]一種檢測傳染病病原體的方法及試劑盒

無效

• 申請號: 200910083898.2
• 申請日: 2009-05-11
• 公開（公告）號: CN101545015A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發明（設計）人: 于常海;劉樂庭;馮曉燕
• 申請（專利權）人: 北京海康基因芯片開發有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 逯長明

1、一種對可能存在于生物樣品中的傳染病病原體進行檢測的方法，包括：

(i)擴增生物樣品的核酸片段，所述核酸片段為以下的一種或一種以上的組合：

流感病毒A亞型基質蛋白1基因的如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段；

流感病毒B亞型的第八節段基因的如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段；

人副流感病毒1亞型核衣殼蛋白基因的如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段；

人副流感病毒2亞型核衣殼蛋白基因的如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段；

人副流感病毒3亞型核衣殼蛋白基因的如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段；

人副流感病毒4亞型磷酸蛋白基因的如SEQ?ID?NO.6所示的核酸片段；

呼吸道合胞病毒N基因的如SEQ?ID?NO.7所示的核酸片段；

風疹病毒的糖蛋白E1基因的如SEQ?ID?NO.8所示的核酸片段；

柯薩奇病毒B1型基因組的如SEQ?ID?NO.9所示的核酸片段；

(ii)用探針進行檢測，所述探針與步驟(i)擴增產物中的一種特異性雜交。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(i)利用NASBA技術擴增樣品的核酸片段，NASBA運行條件為41℃～45℃溫育90～150分鐘。

3、根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(ii)中所述探針與步驟(i)所得擴增產物的雜交在固體支持物上進行。

4、如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(i)使用以下9組寡核苷酸序列的一種或一種以上的組合作為引物進行擴增：

第1組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示；

第2組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.14所示；

第3組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.16所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.17所示；

第4組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.20所示；

第5組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.22所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.23所示；

第6組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.6所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.25所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.26所示；

第7組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.7所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.28所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.29所示；

第8組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.8所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.31所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.32所示；

第9組引物用于擴增如SEQ?ID?NO.9所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.34所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.35所示。

5、根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(ii)使用捕獲探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.37所示，所述捕獲探針直接或間接的連接在固體支持物上。