[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)傳染病病原體的方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910083897.8
• 申請(qǐng)日: 2009-05-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101545010A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于常海;劉樂(lè)庭;馮曉燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京海康基因芯片開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/01;C12R1/46;C12R1/21
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 逯長(zhǎng)明

1.一種非疾病診斷或治療目的的對(duì)可能存在于生物樣品中的傳染 病病原體進(jìn)行檢測(cè)的方法，包括：

（?。U(kuò)增生物樣品的核酸片段，所述核酸片段為肺炎衣原體的外膜 蛋白A基因的如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段或其與以下各種核酸片段 的組合：

流感嗜血桿菌外膜蛋白P6基因的如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段；

肺炎支原體粘附蛋白P1基因的如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段；

肺炎鏈球菌溶血素基因的如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段；

嗜肺軍團(tuán)桿菌的巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白基因的如SEQ?ID?NO.5所示 的核酸片段；

（ⅱ）用探針進(jìn)行檢測(cè)，所述探針與步驟（?。U(kuò)增產(chǎn)物中的一種特 異性雜交；

所述步驟（?。┦褂玫?組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.1所示的核 酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，其下游引物核苷 酸序列如SEQ?ID?NO.7所示或其與以下各組的組合作為引物進(jìn)行擴(kuò)增：

第2組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID? NO.10所示；

第3組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID? NO.13所示；

第4組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.16 所示；

第5組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段，其上游引物核 苷酸序列如SEQ?ID?NO.18所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19 所示；

所述步驟（?。├肗ASBA技術(shù)擴(kuò)增樣品的核酸片段，NASBA運(yùn) 行條件為41℃～45℃溫育90～150分鐘；

步驟（ⅱ）中所述探針與步驟（ⅰ）所得擴(kuò)增產(chǎn)物的雜交在固體支 持物上進(jìn)行；

所述步驟（ⅱ）使用捕獲探針，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.21所示， 所述捕獲探針直接或間接的連接在固體支持物上；

步驟（ⅱ）中使用以下的核苷酸序列作為檢測(cè)探針：

如SEQ?ID?NO.8所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.11所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.14所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.17所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.20所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段。

2.一種對(duì)可能存在于生物樣品中的傳染病病原體進(jìn)行檢測(cè)的試劑 盒，其包含用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.1所示核酸片段的引物或其與用于擴(kuò) 增如SEQ?ID?NO.2所示核酸片段的引物、用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.3所示 核酸片段的引物、用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.4所示核酸片段的引物和用于 擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.5所示核酸片段的引物中的一組或一組以上的組合；

所述引物選自：

第1組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7 所示；

第2組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID? NO.10所示；

第3組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ?ID? NO.13所示；

第4組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.16 所示；

第5組引物用于擴(kuò)增如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段，其上游引物 核苷酸序列如SEQ?ID?NO.18所示，下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19 所示；

還包含如核苷酸序列SEQ?ID?NO.21所示的捕獲探針；

還包含以下至少一種與引物對(duì)應(yīng)的檢測(cè)探針：

如SEQ?ID?NO.8所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.1所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.11所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.2所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.14所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.3所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.17所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.4所示的核酸片段；

如SEQ?ID?NO.20所示，檢測(cè)如SEQ?ID?NO.5所示的核酸片段。