[發明專利]一對Q型煙粉虱特異性SCAR引物及快速PCR檢測方法和試劑盒

無效

• 申請號: 200910083559.4
• 申請日: 2009-05-08
• 公開（公告）號: CN101555521A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: 張桂芬;劉循;萬方浩;郭建英;劉萬學
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司
• 代理人: 高 宇

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地，本發明一對Q型煙粉虱特異性SCAR引 物及快速PCR檢測方法和試劑盒。

背景技術

煙粉虱Bemisia?tabaci(Gennadius)屬同翅目，粉虱科，小粉虱屬，是一種嚴重 危害農業生產的入侵性害蟲，為世界自然保護聯盟(IUCN)所列出的全球100種最 危險的入侵物種之一，其寄主植物包括蔬菜、花卉在內的600種以上。煙粉虱的危 害方式有三種，包括直接吸取植物汁液、分泌蜜露影響植物的光合作用，傳播40余 種植物病毒、造成植物病毒病大發生，引起植物生理異常、使產品產量和質量明顯 下降，給農業生產造成了巨大的經濟損失。1991-1992兩年間，美國的加利福尼亞、 佛羅里達、德克薩斯等地由于煙粉虱大暴發而造成的經濟損失共計約7億美元。

煙粉虱是一正在快速進化的復合種，種下包含多個生物型或隱存種。盡管一般 認為B型煙粉虱具有比其它生物型煙粉虱更強的入侵性，然而由于Q型煙粉虱具有 更穩定的抗藥性和更強的生物學優勢以及可以在多種雜草上快速建立種群的特性， 因此在世界某些地區Q型煙粉虱種群仍占上風，并越來越引起國際上的高度重視。 Q型煙粉虱起源于地中海地區，原來僅分布在伊比利亞半島，但近期研究發現已遍 布意大利、以色列及摩洛哥的整個北部地區，并在美國、墨西哥、危地馬拉、日本 等國家發現危害；我國于2003年在云南昆明市郊花卉市場的一品紅上首次發現Q型 煙粉虱，2004年又相繼在北京海淀區、河南鄭州市發現，2005年發現在浙江局部地 區大量發生危害。Q型煙粉虱是傳入我國的另一種外來入侵生物，鑒于其目前僅在 我國局部地區發現，而且Q型煙粉虱在國外一些地區已造成了嚴重的危害，比B型 煙粉虱具有更強的危害性和入侵性，在我國具有進一步擴散和蔓延的可能性。并且 事實上，Q型煙粉虱近些年在世界各地迅速擴散，在許多地區已經逐漸成為最主要 的致害類型。而Q型煙粉虱的傳播以人為傳播為主，因此應該加強對Q型煙粉虱的 檢疫和監測，杜絕人為傳播。

加強檢疫和監測必需建立一套快速而準確的分子檢測方法。目前國際上已有多種 方法用于煙粉虱生物型鑒定：1)形態特征鑒定；2)酯酶、同工酶位點多態性分析； 3)PCR技術等。但目前國內針對Q型煙粉虱尚沒有標準的檢測方法。

在煙粉虱生物型檢測和鑒定中應用較為廣泛的是mtDNACOI技術。mtDNACOI 技術檢測是利用通用型的引物，在DNA聚合酶的催化下，對目標DNA進行體外擴 增，然后將PCR產物回收、純化、測序，根據序列比對和系統發育樹構建來判斷檢 測結果。SCAR-PCR技術檢測是利用特異性的引物，根據預期DNA條帶的有無來判 斷檢測結果，無需測序和序列比對，具有靈敏度高，特異性強，快速和簡便等優點。

發明內容

本發明的目的為提供一對Q型煙粉虱特異性SCAR引物。

本發明的再一目的為提供一種Q型煙粉虱特異性基因片段。

本發明再一目的為提供一種Q型煙粉虱的特異性快速PCR檢測方法。

本發明的另一目的為提供一種Q型煙粉虱的特異性快速PCR檢測試劑盒。

本發明根據Q型煙粉虱特有的基因組DNA序列，設計一對特異性引物，該引 物只對Q型煙粉虱具有擴增能力。是對Q型煙粉虱mtDNA?COI技術檢測方法的補 充和改進。同時，本方法采用SCAR-PCR技術，提高了檢測的準確性和靈敏度，節 約了檢測時間，在Q型煙粉虱檢測/監測方面具有很高的應用價值，可以試劑盒的形 式在我國口岸、世博會園區以及種苗調運中推廣。

根據本發明的一對Q型煙粉虱特異性SCAR引物為：

引物BTQE：5′-TGCTTGTCGAAGAGGGTC-3′；和

引物BTQF：5′-TTTAGAAACGTGCCGAAT-3′。

根據本發明的Q型煙粉虱特異性基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?No：1所示。

根據本發明的Q型煙粉虱特異性檢測方法包括使用上述SCAR引物進行PCR擴 增的步驟。

根據本發明的Q型煙粉虱檢測特異性檢測試劑盒包括上述Q型煙粉虱特異性 SCAR引物。

本發明的Q型煙粉虱特異性SCAR引物及快速PCR檢測方法，用于快速檢測Q 型煙粉虱。與國際現有方法相比，本發明具有以下的技術優勢：