[發明專利]生物反應器微載體培養動物細胞生產豬瘟疫苗的方法有效
| 申請號： | 200910082761.5 | 申請日： | 2009-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN101875917A | 公開（公告）日： | 2010-11-03 |
| 發明（設計）人： | 張韌;陳文慶;王建超;劉俊生 | 申請（專利權）人： | 北京清大天一科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243 | 代理人： | 鐘晶 |
| 地址： | 102200 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 生物反應器 載體 培養 動物 細胞 生產 豬瘟 疫苗 方法 | ||
1.一種大規模生物反應器微載體培養動物細胞生產豬瘟疫苗的方法，其包括以下步驟：
1)用轉瓶或小規模反應器微載體擴增培養動物細胞并制成細胞懸液；
2)在大規模反應器的微載體上接種由步驟1)生產的細胞懸液并進行培養；
3)將豬瘟疫病毒接種于上述步驟2)的大規模反應器微載體上的細胞并進行繁殖；
4)收獲病毒液，生產豬瘟疫苗。
其中，所述小規模反應器的體積為10L以下，所述大規模反應器的體積為100～1000L。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)用微載體培養細胞是按以下過程進行的：將微載體經水化和121℃高溫滅菌之后，接種所述動物細胞，微載體的加入量為3-20g/L，接種密度為2×105-6×105cells/ml，接著培養細胞到細胞密度為4×106-7×106cells/ml。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述培養細胞采用灌注培養方式。
4.根據權利要求1-3中的任一項所述的方法，其特征在于，所述動物細胞為豬睪丸細胞即ST細胞或豬腎細胞即PK15細胞。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2)的細胞培養階段的培養液的pH值維持在6.8-7.4的范圍內，步驟3)的病毒繁殖的pH值維持在7.1-7.5的范圍內。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2)細胞培養的培養液和步驟3)病毒繁殖的培養液的pH值維持在7.1-7.4的范圍內。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟1)中的細胞懸液用0.25％胰酶-0.02％EDTA消化液消化，其pH值維持在7.4-8.0。
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