[發(fā)明專利]一種新的檢測血清樣本中SARS抗體的方法和產(chǎn)品

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910082600.6
• 申請日: 2009-04-28
• 公開（公告）號: CN101533020A
• 公開（公告）日: 2009-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王靜;楊宇;孫肖紅;胡孔新;張曉龍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/546;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 尹振啟

1、一種采用蛋白懸浮芯片檢測血清樣品中SARS抗體的間接免疫學(xué)定量檢測方法，其特征在于，檢測過程中全部反應(yīng)可在96孔濾板或者微量離心管中進行，該方法包括下列步驟：

(1)包被微球的捕獲抗原為SARS-CoV?N蛋白抗原；

(2)向孔內(nèi)加入含已包被捕獲抗原編碼微球的工作溶液，用清洗液清洗；

(3)加入待測血清樣品，孵育后清洗；

(4)加入用生物素化的檢測抗體，孵育后清洗；

(5)加入鏈親和素-藻紅蛋白，孵育后清洗；

(6)加入檢測緩沖液后混勻；

(7)用懸浮芯片系統(tǒng)讀取平均熒光強度(MFI)數(shù)值并分析數(shù)據(jù)判定檢測結(jié)果。

2、權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述SARS-CoV?N蛋白抗原為重組SARS-CoV全長核蛋白-N32(aa1-422)和重組SARS-CoV核蛋白片段N13(aa221-422)，均經(jīng)鎳親和柱純化。

3、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用生物素標(biāo)記的羊抗人IgG作為檢測抗體，并且其與SARS-CoV?N蛋白的組合組成間接法檢測體系。

4、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包被微球的捕獲抗SARSN蛋白抗原用量為3-9μg/1.25×10⁶個編碼微球或6～36ng/2500-5000個微球/測試。

5、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中的標(biāo)記檢測抗體羊抗人IgG的生物素為羧基活性的生物素。

6、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，2mg/mL生物素化的檢測抗體Bio-羊抗人IgG以1:2500稀釋作為檢測抗體進行檢測。

7、一種定量檢測血清樣品中SARS抗體的蛋白懸浮芯片方法，其特征在于，該方法包括下列步驟：

(1)加入的陽性檢測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)梯度倍比稀釋，所述梯度倍比稀釋為4倍；

(2)將系列稀釋樣品在懸浮芯片系統(tǒng)中檢測讀取對應(yīng)熒光值(MFI)；

(3)制作樣品濃度對應(yīng)MFI值的劑量-反應(yīng)曲線；

(4)用分析軟件擬合劑量-反應(yīng)曲線和方程；

(5)未知濃度樣品可根據(jù)劑量-反應(yīng)曲線和方程判斷未知樣本中SARS抗體的濃度。

8、一種采用檢測血清樣品中SARS抗體的蛋白懸浮芯片，該芯片包括：編碼微球，作為包被微球抗原的SARS-CoV?N蛋白抗原，生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG和羊抗人IgG作為檢測抗體，鏈親和素-藻紅蛋白和適宜的緩沖溶液。