[發明專利]與衰老相關退行性疾病的線粒體ND3基因SNP G10320A分子標記、檢測方法及試劑盒

無效

• 申請號: 200910081562.2
• 申請日: 2009-04-13
• 公開（公告）號: CN101525665A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 楊澤;馮潔;孔放;張建佚;陳靜;萬鋼;齊科研;唐雷
• 申請（專利權）人: 衛生部北京醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 程鳳儒

1、一種與衰老相關的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記，其特征在于，DNA序列如SEQ?ID?No.1所示。

2、根據權利要求1所述的與衰老相關的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記，其特征在于，所述SEQ?ID?No.1中第10320位點存在一個分子標記SNPG10320A。

3、根據權利要求2所述的與衰老相關的退行性疾病線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記，其特征在于，所述SEQ?ID?No.1的第10320位點分子標記為G或A。

4、一種檢測權利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的方法，其特征在于，其具體步驟如下：

(1)提取基因組DNA；

(2)線粒體ND3基因單核苷酸多態性識別：

制備混合液：步驟(1)制備的基因組DNA溶液、PCR緩沖液、dNTP、Taq?DNA聚合酶、PCR引物、PLUS+飽和熒光染料、寡核苷酸探針和純水；

PCR條件：在95℃5分鐘，95℃1分鐘，63.5℃30秒，72℃10秒，72℃7分鐘，進行35個循環；反應完成后，將PCR產物再進行兩個變性和復性的循環，95℃變性30秒，25℃復性2分鐘，共2個循環；

(3)將步驟(2)制備的樣本進行高分辨熔解曲線分析。

5、根據權利要求4所述的檢測線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的方法，其特征在于，所述PCR引物為：

堿基序列如SEQ?ID?No.2所示的：

F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；

堿基序列如SEQ?ID?No.3所示的：

R1：5’-TrGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。

6、一種用于檢測權利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的特異性引物，其特征在于，其長度為21～23bp，堿基序列如SEQ?ID?No.2所示的

F1：5’-ATTTGATCTAGAAATTGCCCTCC-3’；堿基序列如SEQ?ID?No.3所示的R1：5’-TTGTAGTCACTCATAGGCCAG-3’。

7、根據權利要求6所述的特異性引物，其特征在于，所述的特異性引物可以擴增出含有mtDNA10320位點的ND3基因序列。

8、一種檢測權利要求2所述的線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的試劑盒，其特征在于，該試劑盒由以下試劑組成：

(1)130ul純水；

(2)20ul?10X?PCR緩沖液；

(3)4ul?10mM?dNTP混合液；

(4)20ul?1unit/ul?Taq?DNA聚合酶；

(5)2ul?1pmol/ul?F1引物；

(6)2ul?10pmol/ul?R1引物；

(7)20ul?1XLCGreen?PLUS+飽和熒光染料，

(8)探針：2ul?10pmol/ul?C1；

其中引物F1堿基序列如SEQ?ID?No.2所示，R1如SEQ?ID?No.3所示；探針C1堿基序列如SEQ?ID?No.4所示。

9、權利要求8所述的檢測線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的試劑盒用于預測衰老相關的退行性疾病的應用。

10、根據權利要求9所述的檢測線粒體ND3基因SNP?G10320A分子標記的試劑盒的應用，其特征在于，所述衰老相關的退行性疾病為：中風、心血管疾病、2型糖尿病、帕金森病和/或老年性癡呆。