[發(fā)明專利]一種檢測液態(tài)醛的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910080912.3
• 申請日: 2009-03-25
• 公開（公告）號: CN101509874A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏東芝;邢艷瓏;毛相朝;王舒
• 申請（專利權(quán)）人: 青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 周長興

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及熒光探針的應(yīng)用領(lǐng)域，更具體的涉及一種檢測液態(tài)醛的方法。

背景技術(shù)

醛是一種重要的基于生物氧化還原催化技術(shù)的化學(xué)品，許多醛類如異戊醛、正己醛、香茅醛、苯乙醛等可以作為香料、添加劑或者生產(chǎn)香料和添加劑的原料，具有很大的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值(欒春剛，陳學(xué)璽，王彥榮，天然香料及生物質(zhì)香料的研究動(dòng)向，天津化工，2008，22，13-16)。

目前，用于醛的檢測的方法主要有氣相-液相色譜法(Raffaella?Gandolfi，Nicola?Ferrara?and?Francesco?Molinari，Tetrahedron?Letters，2001，42，513—514)、高效液相色譜法(Andersson?G，Andersson?K，Nilsson?CA?et?al.1979，Chemosphere，10，823-827)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(Man?Xu，Zichuan?Zhang，Gang?Fu?et?al.Journal?of?Chromatography?B，2007，856，100—107)、比色法(Altshuller?AP，Miller?DL，Sleva?SF，Anal.Chem.1961，33，621-625)、熒光法(Monika?Konarzycka-Bessler?and?Uwe?T.Bornscheuer，Angew.Chem.Int.Ed.，2003，42，1418-1420)等。

其中，用肼類試劑對醛進(jìn)行衍生化后用色譜法或熒光法檢測是一種常用的、最廣泛的方法，但是一方面用色譜法檢測操作復(fù)雜；另一方面，肼試劑的應(yīng)用受到限制，有的只能檢測短鏈醛、有的是只能檢測脂肪醛，(Martin?Vogel·Andrea?Büldt·Uwe?Karst，F(xiàn)resenius?J?Anal?Chem，2000，366，781—791)，而且該類試劑需要復(fù)雜的合成，如果通過商業(yè)化購買價(jià)格較高。因此，需要發(fā)展一種靈敏、快速、操作簡便、成本低、普遍適用的方法來檢測液態(tài)醛。

在已有文獻(xiàn)報(bào)道的方法中，熒光試劑衍生化結(jié)合高效液相色譜法(HPLC)是比較多的，但是HPLC的一個(gè)最大優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，有時(shí)熒光法的靈敏度都達(dá)不到。在文獻(xiàn)Sonoko?Uzu，Susumu?Kanda?and?KazuhiroImai，Analyst，1990，115，1477-1482中，作者用了兩種方法檢測醛，一是用單純的熒光法，檢測限為微摩爾/升數(shù)量級；二是用熒光試劑衍生后用HPLC，檢測限為飛摩爾/升數(shù)量級。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種操作方便、快速響應(yīng)、高靈敏度檢測液態(tài)醛的方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的檢測液態(tài)醛的方法，其主要步驟包括：

A)選擇帶有氨基的熒光染料作為熒光探針，配制成探針溶液；

B)在濃度為10-50微摩爾/升的探針溶液中，加入0.2-1.0摩爾/升pH6.0-7.5的磷酸緩沖液(PBS)搖勻后做空白對照；

C)在濃度為10-50微摩爾/升的探針溶液中，依序加入0.2-1.0摩爾/升pH6.0-7.5的磷酸緩沖液和10-40微摩爾/升的含醛物質(zhì)的溶液，搖勻后置于20-30度水浴中，反應(yīng)15-60分鐘后測510-520納米波長處的熒光強(qiáng)度。

本發(fā)明的探針溶液和緩沖液的加入量比例按體積比計(jì)算，控制在1-3:1-5較理想。

步驟A的帶有氨基的熒光染料可以是5-氨基熒光素、6-氨基熒光素或5，6-氨基熒光素消旋體。

步驟C中的含醛物質(zhì)包括有：C2-C9的醛、香茅醛、檸檬醛、丁烯醛、苯甲醛、苯乙醛、羥基苯甲醛以及在微生物發(fā)酵過程中以醇為底物催化氧化生成的醛。

步驟C的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選地為20-30分鐘。

步驟B和步驟C的緩沖液pH優(yōu)選地為6.8-7.2。

步驟B和步驟C的緩沖液中還可以包括有4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液(HEPES)。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的探針分子空白及其與異戊醛結(jié)合后產(chǎn)物的熒光激發(fā)發(fā)射發(fā)射譜圖，橫坐標(biāo)為波長(納米)，縱坐標(biāo)為熒光強(qiáng)度。

圖2是本發(fā)明的熒光探針分子與異戊醛結(jié)合后產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度與pH變化關(guān)系圖，橫坐標(biāo)為pH值，縱坐標(biāo)為相對熒光強(qiáng)度(即產(chǎn)物與空白對照的熒光強(qiáng)度的差值)。