[發明專利]鼠RANK胞外蛋白晶體

有效

• 申請號: 200910080734.4
• 申請日: 2009-03-26
• 公開（公告）號: CN101845090A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 唐佩福;劉長振;黃鵬;張世謙;高斌
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院;北京表源生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C30B29/54;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 余剛;張英

1.一種胞外區域蛋白的晶體，其中所述晶體包括鼠RANK胞外區域的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的晶體，其中所述胞外區域是指鼠RANK單體N-末端從26位氨基酸至210位氨基酸。

3.根據權利要求1所述的晶體，其中所述晶體由鼠RANK單體鏈A及單體鏈B形成的二聚體構成。

4.根據權利要求1-3任一項所述的晶體，其中所述晶體具有空間群P2₁2₁2₁，晶胞參數為：和

5.根據權利要求1-3中任一項所述的晶體，其中所述二聚體以反向平行形式存在；所述單體鏈A及單體鏈B含有四個CRD結構域，存在于所述四個CRD結構域中的多個二硫鍵使得所述兩個單體鏈形成細長的帶狀；所述兩個單體鏈的重疊所形成的均方根差為除去溶劑后的二聚體所形成的總面積為所述兩個單體之間所包含的面積被等分，所述二聚體的長度與所述RANK的單體鏈長度近似。

6.根據權利要求5所述的晶體，其中在所述二聚體中，所述四個CRD結構域具有不同的均方根差值，所述均方根值的范圍為對于C?α原子從CRD3的至CRD2的

7.根據權利要求5所述的晶體，其中所述單體鏈A以及單體鏈B主要在所述CRD2和CRD3結構域發生相互作用，涉及到所述相互作用的重要殘基為所述單體鏈A的Gln-145、Asn-147和Lys-171以及所述單體鏈B的Asn-147、Gln-145和Glu-84。

8.根據權利要求1-3中任一項所述的晶體，其中所述單體鏈A以及所述單體鏈B分別存在一個鈉離子，所述鈉離子可與所述兩個單體鏈上的Cys-134、Ala-135、Phe-138、Val-163以及骨架上的Ser-161側鏈的羰基基團螯合。

9.一種制備RANK胞外蛋白晶體的方法，包括：(1)將純化的RANK在pH?7.00的1M?TRIS緩沖溶液中濃縮成10mg/mL；

(2)在溫度為294K的條件下，利用高通量納升坐滴蒸汽擴散方法形成RANK胞外蛋白的晶體；3)所述RANK晶體在20％PEG?3350，0.2M酒石酸鈉條件下生長。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述RANK晶體在30％的PEG?5000，0.2M的硫酸鈉，以及pH6.5的0.1M?MES的條件下生長。

11.根據權利要求9所述的方法，其中所述RANK晶體在含有100nL蛋白質溶液和100nL?pH為6.5的10％PEG?3350，15％PEG?5000，0.1M硫酸銨，0.1M酒石酸鈉和0.05M?MES的池液的液滴中生長。

12.權利要求1-3中任一項所述的鼠RANK胞外蛋白晶體在篩選治療骨吸收類疾病或抗骨吸收藥物中的應用，包括：

根據所述蛋白晶體的結構，通過計算機模擬來篩選可能結合到特定部位的任一種多肽、蛋白質、抗體、免疫結合物、無機物或有機物；

根據該蛋白晶體的結構，通過計算機模擬來篩選可能結合到特定部位的已知多肽、蛋白質、抗體、免疫結合物、無機物或有機物；

其中與所述RANK胞外蛋白序列具有至少50％同源性的任何RANK胞外蛋白結合的多肽、蛋白質、抗體、免疫結合物、無機物或有機物或者與RANK胞外蛋白的親和力PD₂值＞4.0的多肽、蛋白質、抗體、免疫結合物、無機物或有機物為候選物；

通過生物學實驗確定所述候選化合物在治療骨吸收類疾病或抗骨吸收藥物中的應用。