[發明專利]用于蛋白懸浮芯片檢測的血清樣品處理制劑

無效

• 申請號: 200910080255.2
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN101504410A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發明（設計）人: 王靜;楊永莉;孫肖紅;楊宇;胡孔新
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 尹振啟

技術領域

本發明涉及一種血清樣品的處理制劑，尤指一種用于蛋白懸浮芯片檢測的血清樣品處理制劑。

背景技術

隨著全球生物安全戰略的廣泛實施，針對病原生物的快速診斷需求明顯增加，像經典的檢測方法如檢測核酸的各類PCR、原位雜交、DNA芯片、NASBA等技術，檢測蛋白質等抗原、抗體物質的ELISA、免疫層析技術、蛋白芯片技術等，都具有各自的特點。但是一般的方法主要檢測單種病原或傳染病，面對一個感染者，難以實現多病因的同時篩查。

懸浮芯片檢測的基本原理是利用聚苯乙烯(polystyrene)所制作的微球，包覆不同比例的紅色和橙色兩種熒光染料，當微球被635nm的激光照射后，發射658nm和712nm的熒光。比較二者發射光的比率，能夠區分100種不同的熒光微球，而產生100種不同比例顏色，作為100種獨特的色彩編號，每顆微球大小約5.6μm，可依不同研究目的如免疫分析、核酸研究、酶分析、受體和配體識別分析等，并根據不同研究目的而標定特定抗體、核酸探針及各種受體探針。標記探針的微球與待測物在96孔板中進行反應。檢測通道中設有兩道激光，一道識別微球分類編碼以確定檢測項目；一道記錄熒光信號強弱以檢測待測物的含量。當待測樣本與特定微球的探針吸附在一起時，兩道激光所激發的光都可被檢測到。而若樣本中不含該標的物，則僅有微球中的激發光可被檢測到。再通過機器與計算機自動統計分析兩道激光所激發的微球種類與信號強弱，判定待測樣本中有幾種測試目標物在其中，從而得知測試樣本中有無待測病原存在，或同時存在有幾種至數十種病原。

采用蛋白懸浮芯片進行檢測時，其檢測對象主要可分為抗原和抗體兩大類，目前，應用蛋白懸浮芯片檢測蛋白質時多是用抗體包被微球然后檢測體液中的細胞因子或是抗原，但是在檢測不同的抗原時需要選擇不同的抗體，由此就增加了實驗的繁瑣程度。如果用抗原包被微球，進而檢測血清中的抗體就可簡化實驗，易于操作。但是，由于血清中的抗體成分種類復雜繁多，用抗原包被的微球檢測抗體常常出現嚴重的非特異性吸附現象，嚴重影響檢測敏感性，因此，采用懸浮芯片檢測血清時需要制備一種能有效降低血清中非特異性吸附的樣品處理制劑。

蛋白懸浮芯片用于檢測抗體的原理基于免疫學中抗原抗體的特性性反應，在免疫學中用于檢測抗體的方法有酶聯免疫吸附劑測定(ELISA)間接法中測抗體時，所用的血清樣本處理液為PB或PBS溶液，將PB或PBS溶液用于懸浮芯片檢測的血清樣本處理液時，非特異性吸附較嚴重，易出現假陽性和弱陽性，主要是由于人血清中含有約40％以上的異嗜性抗體，易與微球發生非特異性吸附，從而導致假陽性和弱陽性的現象。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可減少待測血清樣品中非特異性吸附的樣品處理制劑，尤其是用于蛋白懸浮芯片檢測的樣品處理中，由此提高蛋白懸浮芯片檢測的靈敏度，而且該血清樣品處理制劑的原料來源容易，配制方法簡便。

為達到上述目的，本發明提供一種用于蛋白懸浮芯片檢測血清抗體的樣品處理制劑，其特征在于：該制劑包括基礎緩沖液、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，其中，該基礎緩沖液的pH值在5.5-9.0之間，聚乙烯醇的質量體積百分比含量在0.05％-1.5％(即0.5-15毫克/毫升)之間，聚乙烯吡咯烷酮的質量體積百分比含量在0.05％-2.0％(即0.5-20毫克/毫升)之間。

本發明所述的血清樣品處理制劑進一步含有所屬技術領域常用的封閉劑，例如，所述封閉劑可選自BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、賴氨酸等中的一種或多種。

本發明所述的血清樣品處理制劑進一步包括所屬技術領域的常用防腐劑，所述防腐劑例如是：疊氮鈉、硫汞撒或慶大霉素。

本發明的處理制劑中的基礎緩沖液可以為生物化學中常用的緩沖液或鹽溶液，例如，可選自Tris緩沖液、Hepes緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液等中的一種或幾種的混合液。

本發明所述的樣品處理制劑還可以含有高分子表面活性劑，其選自海藻酸鈉、甲基纖維素、聚維酮等中的一種或多種。

本發明的樣品處理制劑中包括特定含量的高分子表面活性劑聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮，因此可有效的降低血清樣品中的非特異性吸附，使之在經過簡單處理后適用于懸浮芯片檢測，從而提高懸浮芯片分析方法檢測血清樣品的能力。另外，本發明優化了所述制劑中的聚乙烯醇和聚乙烯吡咯酮的濃度、基礎緩沖液pH值，適用于蛋白懸浮芯片的血清檢測。