[發明專利]纖維蛋白原-420及其活性結構域的新用途

有效

• 申請號: 200910079569.0
• 申請日: 2009-03-06
• 公開（公告）號: CN101822823A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發明（設計）人: 羅永章;唐華東;付彥
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: A61K38/36
• 分類號: A61K38/36;A61K38/17;A61P25/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及纖維蛋白原-420及其活性結構域的新用途。

背景技術

纖維蛋白原存在于血液當中，是凝血過程中的一種重要蛋白，又稱為凝血因子 I，其分子量大約340,000道爾頓，由兩個亞基通過二硫鍵連接形成二聚體，每個 亞基由3條多肽鏈相互纏繞組成，分別叫做A，B，C鏈。在凝血過程中，纖維蛋白 原被凝血酶酶切，生成纖維蛋白進而形成不溶的纖維蛋白多聚體，由纖維蛋白多聚 體形成的血纖維和血小板一起構成牢固的止血栓。纖維蛋白原在血液中的含量約為 1.5-4毫克/毫升，同時纖維蛋白原也是一種應激蛋白，其含量與機體的免疫狀態有 關，且可以反映心腦血管疾病的危險程度。

纖維蛋白原-420是纖維蛋白原的一種亞型，其A鏈C末端比普通的纖維蛋白原 的A鏈延伸出一個球狀結構域，該球狀結構域與B，C鏈末端的球狀結構域具有很高 的同源性，稱作alpha?EC結構域蛋白。纖維蛋白原-420的分子量約為420,000 道爾頓，有別于一般組織纖維蛋白原的分子量340,000道爾頓。

蛋白構象病(protein?misfolding?disease)是由于組織中特定的蛋白質發生 了構象變化，進而聚集并產生淀粉樣沉淀(amyloidosis)，最終出現組織器官的病 理性改變的一類疾病，如阿爾茨海默癥，瘋牛病等都屬于這一類病癥。對于這類病 癥目前還沒有很好的防治方法。已有的方法如單克隆抗體技術，化學小分子，合成 多肽等，存在免疫排斥，缺乏廣譜性，副作用大，體內半衰期短等缺點。

細胞內存在大量的熱休克蛋白(heat?shock?protein)或分子伴侶 (chaperone)，在機體遭受刺激時大量表達，保護細胞內的蛋白免受高溫、自由基、 有機溶劑(如乙醇)等的傷害。但是在循環系統內不存在熱休克蛋白，機體保護細 胞外的蛋白分子的機制目前還不清楚。

發明內容

本發明的目的是提供纖維蛋白原420及其活性結構域的新用途。

本發明人的研究表明，纖維蛋白原420是人體自身的蛋白分子，在體內不會被 很快降解，也不會產生免疫排斥反應；具有分子伴侶活性和廣譜的非特異性的保護 作用，能促進變性蛋白正確折疊，穩定蛋白構象和功能，可以在蛋白復性、質量控 制中變性蛋白檢測和抗蛋白變性等方面廣泛應用。所述的蛋白可以為重組蛋白或天 然蛋白。

纖維蛋白原-420分子包含alpha?EC結構域蛋白，并且單獨alpha?EC結構域蛋 白也具有與纖維蛋白原-420相同的或類似的功能；其中，alpha?EC結構域蛋白的 氨基酸序列如序列表中序列1所示；纖維蛋白原-420具體可為人的纖維蛋白原 -420。

纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白可以通過配制成蛋白試劑來使用。所 述蛋白試劑至少包括纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白，也不排除其他的溶 劑和添加劑。所作用的其他蛋白和纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白的比例 在25∶1到1∶100的之間，當然包括1∶1這樣的比值，都可以達到比較好的效果。 不同的最佳比值取決于應用的具體情況。

本發明的研究表明纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白能抑制變性的蛋白 聚集保護蛋白活性，可用于制備治療蛋白構象病病的藥物。

其中，所述治療蛋白變性疾病的藥物，是以纖維蛋白原-420或alpha?EC結構 域蛋白為活性成分的藥物。所述治療蛋白變性疾病的藥物可用于治療多種原因引起 的蛋白變性疾病，如發燒引起的熱變性，由煙、酒、氧自由基等有害物質造成的蛋 白變性。

其中，所述治療蛋白構象病的藥物，是以纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域 蛋白為活性成分的藥物。

本發明的纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白能捕捉蛋白的解折疊過程， 通過幫助蛋白正確的折疊或者使其保持在一個折疊的狀態，從而保持功能或者防止 蛋白聚集，繼而穩定蛋白的活性和功能。因此，纖維蛋白原-420或alpha?EC結構 域蛋白可增強蛋白抗變性能力，在體外可作為蛋白穩定劑使用。

其中，所述蛋白穩定劑，是以纖維蛋白原-420或alpha?EC結構域蛋白為活性 成分的蛋白穩定劑；所述蛋白穩定劑可抑制那些容易聚集沉淀的蛋白的聚集；所述 蛋白穩定劑還可以保護酶的活性，如穩定檸檬酸合成酶、熒光素酶，胰島素等的酶 活性。