[發(fā)明專利]一種普蘭林肽的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910079134.6
• 申請(qǐng)日: 2009-03-04
• 公開（公告）號(hào): CN101824086A
• 公開（公告）日: 2010-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬永;郭夏;張志強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京德眾萬全藥物技術(shù)開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/575
• 分類號(hào): C07K14/575;A61P3/10;A61P3/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種普蘭林肽的制備方法，特別是一種采用收斂合成制備方法。

背景技術(shù)

普蘭林肽(式I)是人工合成的胰淀素類似物，是穩(wěn)定的水溶性物質(zhì)，結(jié)構(gòu)特征為胰淀素25位的丙氨酸、28位和29位的絲氨酸用脯氨酸代替，普蘭林肽作用與胰淀素類似，通過減慢餐后胃排空速度而控制餐后血糖，作用維持約3h，但并不改變碳水化合物和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的總量。同時(shí)，其抑制餐后胰高血糖素的分泌和引起飽腹感也可起到控制血糖的作用。其可抑制食欲，可能有降低體重的作用，其用于1型和2型成人糖尿病患者控制血糖，也是目前除胰島素外唯一可用于治療1型糖尿病的藥物。

WO-A-93/10146和US-A-5424394報(bào)道了一種采用固相合成法制備普蘭林肽的方法，選擇一個(gè)組成多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性樹脂上，在此樹脂上將需要的單個(gè)的氨基酸依次通過共價(jià)鍵的方式偶聯(lián)上去來延長(zhǎng)肽鏈，合成多肽。首先選擇將賴氨酸(Lys)固定在不溶性樹脂上，然后把需要的氨基酸依次偶聯(lián)上去，接著使肽鏈的2位和7位兩個(gè)半胱氨酸發(fā)生分子內(nèi)環(huán)合，得到二硫基橋鍵，最后脫除固定樹脂，依次類推，逐個(gè)將單個(gè)的氨基酸連接上去，最終制備得到普蘭林肽。很顯然對(duì)于包含37個(gè)氨基酸的普蘭林肽來說，該方法的合成路線很長(zhǎng)，固相合成的純化方法是每步反應(yīng)后洗滌樹脂，來達(dá)到純化目的，而且普蘭林肽中有很多重復(fù)的氨基酸片段，需要多次重復(fù)偶聯(lián)，因此整個(gè)工藝操作繁瑣，收率極低，成本很高，不適合工業(yè)化。

WO2006/045603報(bào)道了另外一種利用固相合成法制備普蘭林肽的方法，首先選擇設(shè)計(jì)組成普蘭林肽的幾個(gè)組成合理的氨基酸殘基片段，然后通過收斂合成以共價(jià)鍵的形式將幾個(gè)片段合理的偶聯(lián)起來，制備得到普蘭林肽。該路線采用的收斂合成法是制備多肽化合物的有效方法，但收斂合成法的關(guān)鍵是找到合適的氨基酸片段和偶聯(lián)順序以克服偶聯(lián)困難，產(chǎn)物難以分離的問題以及偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)末端手性碳原子的外消旋化。很顯然，包含37個(gè)氨基酸的普蘭林肽有很多可能的合成片段和偶聯(lián)順序，而目前的專利技術(shù)中沒有做詳細(xì)的研究報(bào)道，而且采用的片段，偶聯(lián)順序均較隨意，整個(gè)設(shè)計(jì)不太合理，合成分離困難，操作復(fù)雜，收率較低，而且成本較高，不適合工業(yè)化。

WO2009/003666報(bào)道了一種另外一種普蘭林肽的制備方法，

13??????????????????????????????????????24

Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-OH?????????(III)

25??????????????????????????????????????????????37

Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-NH₂(IV)

該方法同樣是采用收斂合成法，共有6步反應(yīng)，設(shè)計(jì)制備普蘭林肽的三個(gè)合理的片段，即(I)、(III)和(IV)，同時(shí)采用如下偶聯(lián)順序：先(III)和(IV)偶聯(lián)，再與(II)發(fā)生偶聯(lián)制備得到普蘭林肽，整個(gè)路線設(shè)計(jì)相對(duì)合理，操作簡(jiǎn)單，但每個(gè)片段包含12個(gè)氨基酸片段，比較長(zhǎng)，合成路線較長(zhǎng)，每次洗脫樹脂損失嚴(yán)重，而且連接處氨基酸活性基團(tuán)，位阻較大，反應(yīng)效率較低，成本較高，不太適合工業(yè)化。

鑒于普蘭林肽及其鹽、特別是其醋酸鹽的藥學(xué)價(jià)值，有必要通過更有效的合成方法得到普蘭林肽，我們本著反應(yīng)步驟較少，原料易得，操作簡(jiǎn)單，收率較高，處理“三廢”成本較低，適合工業(yè)化生產(chǎn)的原則，發(fā)明了一種普蘭林肽合成的新路線。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種普蘭林肽的制備方法，包含采用1-8，9-19，20-28，29-37的四個(gè)氨基酸殘基片段，通過收斂包含1-8，9-19，20-28，29-37的四個(gè)氨基酸殘基片段通過收斂合成，制備包含37個(gè)氨基酸序列的普蘭林肽。本制備方法采用的氨基酸片段長(zhǎng)度合適，不僅降低了損失，減少了末端手性碳的異構(gòu)化，而且片段之間的連接氨基酸，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，活性基團(tuán)單一，位阻較小，偶聯(lián)收率較高，易于純化。

更具體的講，本發(fā)明提供的普蘭林肽制備方法，首先通過固相合成法制備得到氨基酸殘基片段式(V)，(VI)，(VII)，(VIII)化合物：

其中Boc，F(xiàn)moc，Trt，tBu，Pbf分別代表保護(hù)基。

首先將(VI)與(VII)偶聯(lián)得到(IX)：

然后(IX)與(VIII)偶聯(lián)得到(X)：

接著(X)與(V)偶聯(lián)得到(XI)：