[發明專利]一種炭疽芽孢桿菌及其芽孢的膠體金檢測試紙及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910078821.6
• 申請日: 2009-03-04
• 公開（公告）號: CN101493459A
• 公開（公告）日: 2009-07-29
• 發明（設計）人: 王靜;張曉龍;孫肖紅;李偉;楊宇;胡孔新;謝士嘉
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 尹振啟

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種炭疽芽孢桿菌抗原及其芽孢的檢測試紙及其制備方法和在檢測炭疽芽孢桿菌中的應用。

背景技術

炭疽是由炭疽桿菌所引起的一種人畜共患急性傳染病。人們從認識這種疾病并與其斗爭已經有100多年的歷史，積累了豐富的防治經驗。然而，目前階段，炭疽對人類仍然構成威脅，在世界各地頻繁出現爆發流行，特別是在發展中國家。近年來在非洲最嚴重的人間流行發病達萬余人，每年有大批的牲畜死亡，造成重大的經濟損失，人類炭疽病例也不斷發生。

人是通過直接或間接接觸感染動物而發病，主要是剝食病畜肉、吸入污染炭疽芽孢的氣溶膠而感染。所以，人類發病多為繼發感染，其傳染源為患病的草食動物。動物炭疽通常是食入了被污染的水、草后感染炭疽。人類對炭疽普遍易感，其感染途徑經消化道、呼吸道或皮膚接觸而使人致病。其中皮膚炭疽是最常見的形式，易發生于接觸污染的動物或動物制品的工業或農業部門中。

現有的免疫學檢測方法常采用莢膜抗體作酶標或熒光抗體染色進行診斷，分子生物學有PCR方法，還有許多種傳統的檢驗方法，包括細菌分離培養、溶血性實驗、莢膜染色、噬菌體裂解實驗、串珠實驗等，但上述方法耗時長，而且必須進行大量的純化細菌，要求購買昂貴的儀器，操作繁瑣復雜，需要專業人士具備熟練的操作技能才能準確檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種方便、快捷地檢測炭疽芽孢桿菌的試紙，同時可利用金標免疫分析儀或金標免疫試紙條的反射式光度計等閱讀儀進行的定量檢測方法。該試紙的工作原理是利用特異性抗原-抗體的結合，用膠體金標記抗體，與待檢抗原結合后，使與試紙上結合的捕獲抗體顯色。本發明還涉及制備上述檢測試紙的制備方法。

本發明能夠基于一份標本和一個試紙，快速方便地檢測出標本中的炭疽芽孢桿菌或芽孢，節省了大量人力物力，方便、快速、簡捷。

本發明涉及一種方便、快捷地檢測炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，它包含：

(1)反應支持物；

(2)吸水墊；

(3)硝酸纖維膜，該膜包被有兔抗炭疽芽孢桿菌疫苗株sterne(St)多克隆抗體檢測條帶和質控兔抗羊IgG的質控條帶；

(4)金標抗體保護膜，其中含有膠體金標記的炭疽芽孢桿菌抗體。

本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，它還包含樣品墊，該樣品墊的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。

本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，其中反應支持物選用PVC板。

本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，其中吸水墊選用濾紙。

本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，其中金標抗體保護膜的材料選自聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維，其上均勻涂布有膠體金標記的羊抗St抗體。

另一方面，本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，其中，吸水墊、硝酸纖維膜、金標抗體保護膜、樣品墊和反應支持物按照附圖1所示方式構成；反應支持物5位于底層，硝酸纖維膜2位于反應支持物5上的中部，該膜的T處是兔抗St多克隆抗體包被的檢測條帶，并且C處是兔抗羊IgG包被的質控條帶；金標抗體保護膜3位于硝酸纖維膜上部的一側并與之部分重疊，該膜含有膠體金標記的羊抗St多克隆抗體；吸水墊1位于硝酸纖維膜2上部的相對于金標抗體保護膜3而言的另一側并與2部分重疊；樣品墊4位于2上與1相反的一側并與3部分重疊。

又一方面，本發明涉及的上述炭疽芽孢桿菌的檢測試紙，以吸水墊一側為起始端，樣品墊一側為末端，羊抗St多克隆抗體的檢測條帶位于接近末端，兔抗羊IgG包被的質控條帶接近于起始端。

本發明再一個目的是提供制備所述檢測炭疽芽孢桿菌的試紙的方法，該方法包括以下步驟：膠體金探針的制備，金標墊的制備，硝酸纖維膜的噴涂包被。

1、膠體金探針的制備

(1)將HAuCl₄先配制為0.01％水溶液，磁力攪拌下準確加入1ml?1％的HAuCl₄，同時加入1.5-3ml?1％的檸檬酸三鈉水溶液，顏色穩定后繼續加熱，冷卻至室溫后加純水補足至100ml，4℃避光保存；

(2)用K₂CO₃調PH值為約7-9，優選為約7.8-8.9，更優選約8.2-8.5；

(3)將膠體金調至pH?8.2-8.5，用5mM?PB(pH?7.2)稀釋抗體至0.2mg/ml；

(4)保持膠體金穩定。

本發明還在于提供一種獲得維持膠體金穩定的抗體最佳標記劑量的方法，該方法包括：