[發明專利]用于組織工程皮膚運輸的培養基及其配制方法

無效

• 申請號: 200910078302.X
• 申請日: 2009-02-24
• 公開（公告）號: CN101486995A
• 公開（公告）日: 2009-07-22
• 發明（設計）人: 鄒運動;董益陽;程艷;王軍兵
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;A61L27/60
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司
• 代理人: 解政文

技術領域

本發明屬于一種組織工程皮膚研究中的生物試劑類，特別是一種用于組織工程皮膚運輸的培養基。

背景技術

皮膚是人體最大的器官，它由三部分即表皮層、真皮層和皮下層構成。表皮層位于皮膚的最外層，厚度介于0.06～0.8mm之間，其微結構由基底層、棘細胞層、顆粒細胞層和角質層構成。角質層是角質形成細胞分化的最后產物，其組成中75％～80％為蛋白質，5％～15％為脂類，由10～15層細胞構成厚度大約10μm的結構。角質層有著許多重要的生理功能，能夠有效阻擋外界毒性化合物對皮膚活性細胞的損傷，特別是對化妝品成分中潛在可能產生的細胞毒性有著極為重要的屏障作用。

組織工程皮膚經歷了從表皮替代物、真皮替代物到雙層結構的組織工程皮膚替代物的階段，其基礎研究和應用研究有了廣泛的進步。應用研究涉及體內應用和體外應用，體內應用集中在各種皮膚創傷的治療，體外主要運用于化合物的毒性檢測，如化合物的腐蝕性、刺激性、光毒性、生殖毒性等的檢測。體外毒性檢測方面，歐洲替代方法驗證中心(ECVAM)主導的對各種動物替代方法進行的驗證工作是一項系統工程，引起了世界范圍的關注。以組織工程皮膚為例，進行的化合物腐蝕性檢測目前有EpiDerm和EpiSkin兩種產品通過驗證，刺激性檢測目前有EpiSkin、SkinEthic?RHE和EpiDerm?SIT通過了驗證。雖然在驗證階段已經通過了審查，有的甚至被法規接受，但是，基于組織工程皮膚的化合物檢測在實驗室研究或者是企業產品上的運用并沒有得到推廣。很大程度上是因為迄今為止沒有開發出適合運輸且具備良好性能的組織工程皮膚運輸培養液所致。一方面，組織工程研究屬于高精技術領域，普通實驗室或者公司根本沒有實力開發組織工程產品；另一方面，有能力開發的單位因為沒有找到合適的運輸培養液而限制了產品的推廣甚至是放棄了產品的研發和投入。

目前，市場上還沒有商業化的組織工程皮膚運輸培養液。經檢索，具有穩定性高、操作簡便、組織培養效果好且能有效維持運輸過程中組織工程皮膚的結構和功能的培養液，至今尚未見公開資料。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于組織工程皮膚運輸的培養基，其穩定性高、操作簡便、組織培養效果好且能有效維持運輸過程中組織工程皮膚的結構和功能，具有很高的商業產業化前景。

一種用于組織工程皮膚運輸的培養基，其組分及各組分的用量為：

(1)基礎培養液：由以下體積百分比的物質混配而成：

DMEM培養液????????60～70％

F12培養液?????????20～25％

胎牛血清??????????5～20％

(2)營養物質：

氫化可的松????????0.4～0.5μg/mL

表皮細胞生長因子??5～15ng/mL

異丙基腎上腺素????1～3×10^-6mol/L

胰島素????????????5～15μg/mL

轉鐵蛋白??????????5～10μg/mL

三碘甲狀腺氨酸????2～6×10^-9mol/L

腺嘌呤????????????1～3×10^-4mol/L

維生素C???????????50～100μg/mL

霍亂毒素??????????0.1～1nmol/L

L-絲氨酸??????????1～3×10^-2mol/L

L-肉毒堿??????????1～5×10^-5mol/L

軟脂酸????????????15～35μmol/L

亞油酸????????????5～25μmol/L

花生四烯酸????????5～10μmol/L

牛腦垂體提取物????10～50μg/mL

牛血清白蛋白??????2～7×10^-5mol/L

青霉素????????????100U/mL

鏈霉素????????????100mg/mL

兩性霉素B?????????1～4mg/mL

(3)瓊脂???????????10～25g/L

PH值調整為????????7.2～7.4。

本發明的用于組織工程皮膚運輸的培養基，其配制方法包括以下步驟：

(1)將購買的商用DMEM和F12粉劑分別按照說明書的要求配制成溶液；