[發明專利]植物葉綠體總蛋白的提取方法及其專用提取液

無效

• 申請號: 200910077964.5
• 申請日: 2009-02-05
• 公開（公告）號: CN101475634A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 李銀心;范鵬祥
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/14;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

1.一種葉綠體總蛋白的提取方法，包括以下步驟：

1)將葉綠體總蛋白提取液和葉綠體按照0.5-0.8mL所述葉綠體總蛋白提取液：100mg葉綠體的比例進行混合；將該混合液渦混3-6分鐘；

所述葉綠體總蛋白提取液為水溶液，溶質為如下終濃度的物質：90-110mM的乙二胺四乙酸，90-110mM的三羥甲基氨基甲烷，40-60mM的四硼酸鈉，40-60mM的抗壞血酸，體積百分濃度為0.9-1.1％的Triton?X-100，體積百分濃度為1.9-2.1％的β-巰基乙醇和28-32g/100ml的蔗糖；

2)在步驟1)的體系中加入Tris飽和酚后渦混5-10分鐘；所述Tris飽和酚的加入體積是所述葉綠體總蛋白提取液體積的0.9-1.1倍；

3)離心，吸取上層酚相，將其與過飽和的硫酸銨甲醇溶液混合，在-20℃至-25℃沉淀蛋白至少6小時；所述過飽和的硫酸銨甲醇溶液是所述酚相體積的4-6倍；

4)離心，收集沉淀，將沉淀先用-20℃至-25℃預冷的甲醇洗滌，再用-20℃至-25℃預冷的丙酮洗滌，得到葉綠體總蛋白。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)和步驟2)的反應均在室溫進行。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，將所述葉綠體總蛋白提取液和葉綠體按照0.7mL所述葉綠體總蛋白提取液：100mg葉綠體的比例進行混合；將該混合液渦混5分鐘；

所述步驟2)中，所述渦混的時間為10分鐘；所述Tris飽和酚的加入體積是所述步驟1)中上述葉綠體總蛋白提取液體積的1倍。

4.根據權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述步驟4)中用甲醇洗滌沉淀1次；用丙酮洗滌沉淀2-5次。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟3)中離心的條件為4℃、15000×g下離心15分鐘。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟4)中離心的條件為4℃、15000×g下離心5分鐘。

7.權利要求1-6中任一所述方法在葉綠體蛋白質的定性和/或定量檢測中的應用。