[發明專利]甲胎蛋白及其編碼基因的新用途

無效

• 申請號: 200910077554.0
• 申請日: 2009-01-22
• 公開（公告）號: CN101475996A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 李剛;李孟森
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/68;A61K48/00;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢

技術領域

本發明涉及甲胎蛋白及其編碼基因的新用途。

背景技術

肝細胞癌是高發病率的腫瘤，嚴重威脅人類健康。肝癌細胞耐受化學藥物是造成肝癌細胞復發、轉移和難治的主要原因。肝癌細胞耐受化學藥物誘導凋亡的分子機制至今還不清楚。

RA是維生素A的衍生物，它通過與細胞內的受體RAR(α、β、γ)和RXR(α、β、γ)結合調控相關基因表達而發揮調節細胞分化和誘導細胞凋亡的作用。因RA能有效的誘導腫瘤細胞凋亡而且毒性小，所以在在臨床上已開始將其應用于肺癌、乳腺癌和肝癌等實體腫瘤的治療，早前該RA已被廣泛應用于白血病治療；但肝癌細胞明顯耐受藥理劑量的RA作用，使用RA治療肝腫瘤效果并不理想。肝細胞癌耐受RA是限制使用RA治療肝癌的重要因素，因而探索肝癌細胞耐受RA的分子機制是合理使用RA治療肝腫瘤的理論基礎。

甲胎蛋白(AFP)是肝癌細胞發生發展過程高表達的特異性很高的蛋白質。有關研究表明AFP能通過受體介導促進癌基因(如c-ras等基因)的表達，導致肝癌細胞增殖；AFP也能通過抑制肝癌細胞表達TRAIL受體，減少腫瘤細胞與淋巴細胞分泌的TRAIL結合，從而導致肝癌細胞逃避淋巴細胞的免疫監視；AFP能與細胞內的蛋白質結合，通過影響細胞內的信息傳遞和熱休克蛋白的功能調節細胞的生長。AFP結構復雜，其3個結構域與相應的配體蛋白結合會產生不同的生物學效應。已經有人推測AFP具有能與胞內類固醇/甲狀腺素類家族受體結合的結構域基礎，但是AFP是否能和這些蛋白質結合還沒有得到研究驗證，而且AFP對胞內受體的生物學功能有沒有影響，也是需要探索的科學問題。

發明內容

本發明的一個目的是提供甲胎蛋白及其編碼基因的新用途。

本發明所提供的甲胎蛋白及其編碼基因的一種新用途是甲胎蛋白及其編碼基因在設計和/或篩選藥物中的應用。

本發明所提供的甲胎蛋白及其編碼基因的另一種新用途是以甲胎蛋白及其編碼基因為靶點的物質在制備藥物中的應用。

其中，所述藥物可為用于預防和/或治療肝癌的藥物。

所述以甲胎蛋白及其編碼基因為靶點的物質可具體為蛋白質或者核酸。

本發明的另一個目的是提供一種以甲胎蛋白及其編碼基因為靶點的用于預防和/或治療肝癌的藥物。

所述藥物的活性成分可具體為核酸。

上述核酸可為抑制所述甲胎蛋白編碼基因表達的小干擾RNA、表達所述小干擾RNA的載體、表達抑制所述甲胎蛋白編碼基因表達的shRNA的載體、與所述甲胎蛋白編碼基因發生同源重組且抑制所述甲胎蛋白編碼基因表達的同源序列或含有所述同源序列的載體。

所述shRNA由莖I、環和莖II構成的莖環結構；所述莖I的序列具體可為GAACGUGG?UCAA?UGUA?UAAU，所述莖II的序列具體可為AUUAU?ACAU?UGAC?CACG?UUC，環結構是UCAAGAG。

本發明的藥物能夠通過抑制肝癌細胞內AFP蛋白的表達，從而減少AFP與RA的受體RAR-β的結合，使更多的RAR-β進入細胞核中，與survivin的啟動子結合從而抑制survivin的表達，進而抑制肝癌細胞的增殖。試驗證明，對于沒有用本發明藥物處理過的肝癌細胞，要用80μM或更高劑量的ATRA才能抑制肝癌細胞的增殖，而用本發明藥物處理過的肝癌細胞，只要用40μM的ATRA就能抑制肝癌細胞的增殖，因此，本發明的藥物降低了肝癌細胞對RA的耐受性，在治療肝癌領域有重要的應用價值。

附圖說明

圖1為AFP或ATRA對Bel?7402生長的調節作用。

圖2為AFP對ATRA誘導Bel?7402凋亡的拮抗作用。

圖3為AFP與RAR-β在胞漿里的相互結合檢測。

圖4為熒光能量共振轉移技術(FRET)分析AFP與RAR-β的相互作用。

圖5為出發載體的圖譜及轉染效率。

圖6為siRNA干擾載體對Bel?7402細胞中AFP和survivin表達的影響。

圖7為siRNA干擾載體對Bel?7402細胞凋亡的影響。

圖8為siRNA干擾AFP表達后，對RAR-β對Bel?7402細胞survivin基因啟動子相互作用的影響。

圖9為編碼shRNA的DNA的設計。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。