[發明專利]人血清白蛋白-干擾素融合蛋白及其編碼基因與應用

無效

• 申請號: 200910076241.3
• 申請日: 2009-01-08
• 公開（公告）號: CN101463089A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 劉志敏;趙洪亮;薛沖
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/11;A61K38/38;A61P35/00;A61P31/12;A61K38/21
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及人血清白蛋白-干擾素融合蛋白及其編碼基因與應用。

背景技術

干擾素(interferon，IFN)是一類具有抗病毒、抗增殖以及免疫調節活性的 細胞因子。根據其活性和產生細胞的類型不同，干擾素可分為干擾素-α，干擾素-β 和干擾素-γ等。其中干擾素-α(如干擾素-α2a，干擾素-α2b和干擾素-α1b) 在臨床上被廣泛用于治療多種病毒性疾病(乙型肝炎，丙型肝炎)和腫瘤。

然而天然干擾素-α的半衰期較短，只有頻繁給藥(在臨床治療中往往采用每 周注射三次的用藥方式)才能獲得令人滿意的療效。如此頻繁的用藥方式再加上較 長的治療周期(6-12個月)使得病人較難承受。因此迫切需要研制出作用時間長的 重組人干擾素-α。

人血清白蛋白(human?serum?albumin，HSA)是機體中一種穩定的且半衰期較 長的蛋白。研究表明許多蛋白藥物與人血清白蛋白交聯或融合后可以顯著地使其半 衰期延長，從而減少用藥次數。

美國HGSI(Human?Genome?Sciences?Inc)公司的Albuferon是一個不含接頭 的人血清白蛋白和干擾素-α2b的融合蛋白(HSA-IFN-α2b)，在該融合蛋白中干 擾素部分處于融合蛋白的C末端，人血清白蛋白部分處于融合蛋白的N末端。目前 Albuferon已進入了III期臨床研究。研究結果表明Albuferon具有較長的體內半 衰期，較高的安全性及較好的療效。但是，HSA-IFN-α2b存在不均一性和不穩定性 等缺陷。IFN-α2b-HSA是通過改變融合蛋白的相位獲得的一個具有更高均一性和穩 定性的新型融合蛋白。IFN-α2b-HSA在提高表達量和回收率，降低生產成本等方面 表現出了明顯的優勢，具有良好的開發前景。(Zhao?HL，Xue?C，Wang?Y，Li?XY， Xiong?XH，Yao?XQ，Liu?ZM.Circumventing?the?heterogeneity?and?instability of?human?serum?albumin-interferon-alpha2b?fusion?protein?by?altering?its orientation.J?Biotechnol.2007?Sep?15；131(3)：245-52)，(劉志敏趙洪亮 等：人血清白蛋白-干擾素融合蛋白及其編碼基因與應用。中國發明專利申請號： CN?200710099325)。

蛋白藥物在生產，存放和使用過程中不可避免要遇到震蕩及受熱等壓力條件， 穩定性較差的蛋白藥物必須采用生產成本高，使用不便的凍干劑型。IFN-α2b-HSA 融合蛋白在震蕩及受熱等壓力條件下的穩定性較差，易形成共價聚體。

發明內容

本發明的目的是提供一種人血清白蛋白-干擾素融合蛋白及其編碼基因與應 用。

本發明所提供的人血清白蛋白-干擾素融合蛋白，命名為IFN-α2b-HSA(C34S)， 是如下(a)或(b)的蛋白質：

(a)由序列表中序列1的氨基酸殘基組成的蛋白質；

(b)將序列表中序列1的氨基酸殘基經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或 缺失和/或添加且具有干擾素α2b活性的由(a)衍生的蛋白質。

為了使(a)中的IFN-α2b-HSA(C34S)便于純化，可在由序列表中序列1的 氨基酸殘基序列組成的蛋白質的N端或C端連接上如表1所示的標簽。

表1.標簽的序列