[發明專利]一種抗梭曼的抗體

無效

• 申請號: 200910076198.0
• 申請日: 2009-01-13
• 公開（公告）號: CN101463088A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 周麗君;王欲曉;王玉霞;楊日芳;王琰;賈蓓媛
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍總醫院
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/395;A61P39/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關 暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種抗梭曼的抗體。

背景技術

梭曼(Soman)屬有機磷酸酯類化合物，通過不可逆地抑制乙酰膽堿酯酶活性而引起一系列的中樞及外周膽堿能癥狀，具有毒性強、作用快、難防難治等特點。因而對梭曼中毒的醫學防護備受關注，是防化醫學研究的重點之一。對于梭曼中毒，用特異性抗體結合游離的梭曼可以避免或降低毒劑對于膽堿酯酶的抑制作用，對梭曼中毒起到預防甚至一定的治療作用。

傳統的雜交瘤技術制備單克隆抗體是將半抗原與載體蛋白連接，直接免疫小鼠，產生鼠源抗體。由于鼠源單克隆抗體具有異源性，不能直接對人體進行免疫，因而其在人體內的應用受到了限制，而人源抗體的制備難度很大。近年來，隨著鼠單抗人源化技術、抗體庫技術和轉基因鼠技術的進展，人源抗體的研制技術正在得到解決，尤其是通過構建大容量、具有良好多樣性的抗體庫，為人源抗體的制備提供了有效的技術平臺。噬菌體抗體庫技術是全套抗體基因展示在噬菌體表面，并能在體外模擬抗體免疫系統的選擇作用，呈現在噬菌體表面的抗體能夠在體外用固相化抗原進行篩選。經過幾輪“吸附-洗脫-擴增”的淘篩，可使特異性噬菌體抗體得到富集。利用噬菌體抗體庫技術借助高效篩選系統，可以不經免疫方便地制備出人源抗體(王琰，化冰，劉群英，等.半合成抗體庫的構建及鑒定.中華微生物學和免疫學雜志，1999；19(3)：23.)。第一個來源于噬菌體抗體庫的治療性人源抗體(抗TNF-α，治療類風濕性關節炎)已于2003年初批準上市，印證了用大容量噬菌體抗體篩選人源抗體的可行性。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗梭曼的抗體。

本發明所提供的抗梭曼的抗體，包括輕鏈可變區和重鏈可變區，所述重鏈可變區的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第133-246位氨基酸殘基，所述輕鏈可變區的氨基酸序列為序列表中序列1的自氨基末端第1-111位氨基酸殘基。

上述抗體具體可為單鏈抗體。

所述抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區之間還可以有連接肽，所述連接肽的長度具體可為21個氨基酸殘基。

上述抗梭曼的抗體為如下1)或2)所示的蛋白質：

1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

2)將序列表中序列1的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有抗梭曼功能的由1)衍生的蛋白質。

上述抗梭曼的抗體的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。

所述抗梭曼的抗體的編碼基因為如下1)-3)中任一所述的基因：

1)其核苷酸序列是序列表中的序列2；

2)在嚴格條件下可與序列表中序列2限定的DNA序列雜交且編碼上述任一抗體的DNA分子；

3)與1)的基因具有90％以上的同源性且編碼上述任一抗體的DNA分子。

含有上述抗梭曼的抗體編碼基因的重組表達載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬于本發明的保護范圍。

本發明的抗梭曼的抗體可以用于制備治療抗梭曼的藥物。

本發明的另一個目的是提供一種治療抗梭曼的藥物。

本發明所提供的治療抗梭曼的藥物，它的活性成分是上述任一所述抗梭曼的抗體。

本發明采用單噬粒載體通過loxp-cre定位重組構建工作庫。梭曼由于分子量較小(M2＝182)、結構簡單、無免疫原性，用梭曼水解過渡態類似物和蛋白偶聯的人工抗原進行抗體庫的篩選，可以篩選出與梭曼結合的抗體，甚至具有水解梭曼活性的抗體酶。在篩選的過程中，用3％的牛血清白蛋白溶解回收抗體，其目的是游離的牛血清白蛋白與抗體庫發生競爭性結合，從而降低非特異性結合。在ELISA檢測過程中，包被小牛血清白蛋白做為抗原，從而選擇特異性與梭曼類似物結合的抗體，進而進一步鑒定其與梭曼結合的活性。